出芽酵母を用いた生理活性脂質の受容体遺伝子単離法の開発

利用酿酒酵母开发生理活性脂质的受体基因分离方法

• 批准号: 05770096
• 负责人: 粂 和彦
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770096/
• 关键词: 出芽酵母; 発現クローニング; G蛋白質

今年度は、研究計画に沿って実験を行い、以下の結果を得た。1.酵母のGalphaタンパク質(GPA1)欠損株(名古屋大学理学部・松本邦弘教授より供与)にラットGsalphaタンパク質と、モルモットGi2alphaタンパク質を、酵母発現ベクターに組み込み、導入したところ、Gsalphaでは機能相補が認められたが、Gi2alphaでは、相補できなかった.発現量を、増やすために、5'非翻訳領域をほぼ完全に取り除き、多コピー型で強力なプロモーターを持つベクターを使用しても、やはり、機能相補は認められなかった.2.そこでGi2alpha蛋白質を酵母内で機能させるために、三量体G蛋白質の他のサブユニットを哺乳動物由来のものに置き換えることを目的として、酵母Gbeta(STE4)欠損株にウシGbetaを、酵母Ggamma(STE18)欠損株に、ウシGgammaを、それぞれ導入したが、機能相補は認められなかった.3.上述の酵母GPA1をラットGsalphaに置き換えたものに、beta-アドレナリン受容体を導入したところ、この受容体のアゴニストであるイソプロテレノールの添加に反応して、酵母の接合ホルモン受容体からのシグナル伝達系が活性化された.このことは、酵母の形態変化と、接合ホルモン誘導性遺伝子(FUS1)の転写誘導により確認された.以上の結果、現段階でこの発現系は、Gsalpha共役受容体のクローニングには使用可能だが、目的とするGialpha共役受容体のクローニングには使用できず、さらに改変が必要と考えられ、現在、さらに改変を進行中で、今年度は本研究内容の公表には至らなかった.

The results of this year's project and research program have been successful. 1. Yeast Galpha strain (GPA1) (supplied by Professor Kunihiro Matsumoto of the Department of Science of Nagoya University). This is not true of the yeast strain (GPA1), which can be used by Professor Kunihiro Matsumoto of the Department of Science of Nagoya University. the yeast strain (GPA1) is not available in the yeast system (Nagoya University). The amount of money, the amount of money, the amount of The Gi2alpha protein in the yeast can be detected by the machine, and the three-body G protein can be used to detect the lactation animal. The reason is that the yeast Gbeta (STE4) is not suitable for lactation, the yeast Ggamma (STE18) is not available, the yeast Ggamma (STE18) is deficient, the yeast Ggamma is not available, and the machine can be used to detect breast-feeding animals. 3. The above-mentioned yeast GPA1, Gsalpha, capacitors, capacitors, Make sure that you want to make sure that you can use the FUS1 to make sure that the yeast is not available. The results of the above results, the results of the above studies, the possible use of Gsalpha co-service tolerances, the use of Gialpha co-service tolerances, the use of Gialpha co-service tolerances, the necessary tests for improvement, and the contents of this study are in progress, and the contents of this study this year.