カルネキシンによる糖鎖シグナル認識と糖タンパク質生合成制御機構の解明

阐明钙连接蛋白的糖链信号识别和糖蛋白生物合成控制机制

• 批准号: 12033211
• 负责人: 井原 義人
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12033211/
• 关键词: カルネキシン; シャペロン; 糖タンパク質; レクチン

カルネキシンは粗面小胞体(ER)に存在するレクチン様分子シャペロンであり、糖タンパク質のフォールディング中間体の正しい組み立てを促進することから、ERでの糖タンパク質の品質管理にとって重要な役割を果たしている。平成12年度は、カルネキシンについて糖タンパク質認識機構の解析を進めるため、カルネキシンin vitroフォールディングアッセイ系の作成と解析を行った。具体的には、モノグルコシル化糖鎖(Glc1Man9)をもつJack bean α-mannosidaseと、α-mannosidaseからEndoHで糖鎖を除去した基質を作成して、カルネキシンの認識する基質に用いた。これらα-mannosidaseを6M塩酸グアニジンで変性した後、熱処理でタンパク質の凝集を誘導した。精製した可溶化カルネキシンを添加して、その基質の凝集抑制能を測定(Light scattering)することにより、シャペロン作用を評価した。また、α-mannosidaseの変性と再活性化について酵素活性の測定を行い、アッセイ系にオリゴ糖やATPを加えることにより、シャペロン作用への影響を検討した。解析の結果、カルネキシンは糖タンパク質のモノグルコシル化糖鎖を認識するとともに変性したポリペプチド部分をも認識することが明かとなった。また、カルネキシンがin vitroでの基質タンパク質の熱による変性を防ぎ、変性タンパク質の再活性化を助けることにより、シャペロン活性を示すことを見い出した。さらに、in vitro実験系ではカルネキシンの基質タンパク質認識において、糖鎖に対する親和性が最も重要であること、また、その分子制御機構において、ATPはカルネキシンのシャペロン機能を促進し、糖鎖結合部位への糖鎖の結合はカルネキシンのペプチド結合能を抑制することも明らかになった。

Small rough-faced cell bodies (ER) exist in a variety of tissues, including molecules, sugar, sugar, fruit, fruit, etc. During the 12-year period in Pingcheng, the information system was analyzed by the knowledge institution, and the in vitro system was made into an analytical system. Specific ingredients, such as Glc1Man9, Jack bean α-mannosidase, α-mannosidase, EndoH sugar, remove the basic sugar to make the sugar, so that you can know how to use it. After the treatment of alpha-mannosidase (6m), acid (acid) and acid (acid), the drug was induced to agglutinate. The precision is soluble, the agglutination inhibition energy is Light scattering, the effect is different, and the effect is different. The enzyme activity was determined by the determination of enzyme activity after reactivation of α-mannosidase. The enzyme activity was determined by the determination of sugar, enzyme activity, enzyme activity and enzyme activity. The results were analyzed and the results were analyzed. The results were analyzed, and the results were analyzed. Please tell me that you have a problem with sexual prevention, reactivation, reactivation, and reaction.This is not true because of the fact that there is a problem in the treatment of in vitro. The most important components of information technology, such as knowledge, sugar, and sex, are known to be the most important components of the in vitro system, such as the molecular control system, the ATP system, and the promotion of the machine. The combination of the sugar binding site and the glucose binding site can inhibit the growth of the blood sugar in the glucose binding site and the combination of the glucose binding site and the glucose binding site.

项目成果

Kang R. et al.: "Cell cycle-dependent regulation of N-acetylglucosaminyltransferase-III in a human colon cancer cell line, colo201."Arch.Biochem.Biophys.. 374. 52-58 (2000)

Kang R.等人：“人结肠癌细胞系colo201中N-乙酰葡糖胺基转移酶-III的细胞周期依赖性调节。”Arch.Biochem.Biophys.. 374. 52-58 (2000)

Saito Y. et al.: "Calreticulin functions in vitro as a molecular chaperone for both glycosylated and unglycosylated proteins."EMBO J.. 18. 6718-6729 (1999)

Saito Y. 等人：“钙网蛋白在体外充当糖基化和非糖基化蛋白质的分子伴侣。”EMBO J.. 18. 6718-6729 (1999)

Yamamoto H. et al.: "Betal,6-N-acetylglucosamine-bearing N-glycans in human gliomas : Implications for a role in regulating invasivity."Cancer Res.. 60. 134-142 (2000)

Yamamoto H. 等人：“人类神经胶质瘤中含有 Betal,6-N-乙酰葡糖胺的 N-聚糖：对调节侵袭性的作用的影响。”Cancer Res.. 60. 134-142 (2000)

Ihara,Y. et al.: "Calnexin discriminates between protein conformational states and functions as a molecular chaperone in vitro."Mol Cell.. 4. 331-341 (1999)

井原，Y.