ヘリコバクターピロリ-の遺伝子多様性の機序解明・DNAポリメラーゼの解析

幽门螺杆菌遗传多样性机制阐明及DNA聚合酶分析

• 批准号: 07770199
• 负责人: 藤本 秀士
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770199/
• 关键词: ヘリコバクターピロリ-; 遺伝子多様性; DNAポリメラーゼ

ヘリコバクターピロリ-の遺伝子多様性の機序を解明するために、この菌のDNAポリメラーゼの解析を試みた。H.pyloriDNAポリメラーゼ遺伝子をクローニングするためのプロープをDegenerated PCRにより作成した。このプロープ作成のためには、Gene bankを検索し、過去に発表されている大腸菌DNAポリメラーゼ遺伝子やTaqDNAポリメラーゼ遺伝子などのアラインメントを行いConserved regionを決定した。その部位の含む最適なPCR primerを選択しdegenerated PCRを行った。その結果、800dpのPCR産物を得た。このPCR産物が目的のものか確認するため塩基配列を決定し、Gene bankのデーターベースを用いてホモロジーを検証したところ、大腸菌のDNAポリメラーゼと非常に高い相同性を示し、このPCR産物がDNAポリメラーゼであることが証明された。次に、このPCR産物をプロープとしてH.py/orf遺伝子ライブラリーのスクリーニングを行った。ライブラリーはUniversity of WashingtonのBerg博士が作成したコスミドライブラリーを用い、コロニーブロットでサザンハイブリダイゼイションを行い陽性のコロニーを探した。約30〜50kbのH.pylorf遺伝子断片をもつクローンを70クローンほど検索した結果、目的遺伝子を含むクローンが見つかった。このクローンを数種類の制限酵素で切断した後、アガロースゲル電気泳動を行い同一プロープを用いてサザンハイブリダイゼーションを行って再確認したところ、XbaIフラグメント(約15〜20kb)に目的遺伝子が存在することをつきとめた。現在、このクローンのサブクローニングと塩基配列の決定を行っている途中である。

Please tell me how to analyze the multiplicity of children. The sequence is to explain the information, DNA the data, and analyze the data. H.pyloriDNA said he didn't know what to do. He didn't know what to do with Degenerated PCR. Please tell me that you need to know that you need to know that you have DNA bacteria, TaqDNA bacteria, TaqDNA bacteria, and so on. You know, you know, you know The location contains the most popular PCR primer. Select the degenerated PCR line. The result of the test and the result of 800dp PCR were successful. The purpose of the PCR item is to make sure that it is based on the determination, the Gene bank, the DNA, the PCR, the PCR, the same, the same. In the second place, you can use PCR to make sure that you don't know what to do. You need to know what to do with the H.py/orf. Dr. University of Washington, Dr. Berg, made a phone call in order to find out how to use it. The results show that the results of the 30~50kb H.pylorf fragments do not show any difference between the results and the results. After the restriction enzyme has been cut off, the electrophoretic activity of the electrophoretic swimming machine will be used in the same way. Please make sure that there is a negative effect on the target data of the 15~20kb (about 15~20kb). At present, we need to make a decision on the basis of the allocation of the column on the basis of the decision.