抗NOR-90抗体が確認するhUBF分子上エピトープの解析

抗NOR-90抗体证实的hUBF分子表位分析

• 批准号: 07770341
• 负责人: 藤井 隆夫
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770341/
• 关键词: 抗NOR-90抗体; hUBF; シェ-グレン症候群; 転写因子; エピトープ

昨年度,申請者は自らがクローニングしたhUBF全長をコードするcDNA(NOR2.8)を用い,融合蛋白を発現させ,Western blot法によりリウマチ性疾患患者血清中の抗NOR-90抗体の検出を行った。その結果,91例中9例に抗NOR-90抗体が見いだされた。うち4例が慢性関節リウマチ,3例が強皮症を有していたが,重複例も含めて7例がシェ-グレン症候群と診断されており,欧米における過去の報告とは異なる結果が得られた。本年度はNOR2.8をさらに制限酵素(Sau3Al)処理し,5つの異なるcDNA断片を得,そのうちの3つの重複しないcDNA発現産物(融合蛋白)を抗原としたELISAを開発し,患者血清とエピトープ領域との関連を追求した。hUBF分子上では,特にDNA結合部位と別の転写調節因子であるhSL1との相互作用部位に主要エピトープが含まれ,特にDNA結合部位との反応性が他の部位に比し高いことが確認された。なお陽性患者が未だ少数であるため,エピトープ反応性と臨床症状との有意な関連は見いださなかったが,強皮症患者ではエピトープが限られているのに対し,シェ-グレン症候群患者においてはその反応性が多様であると考えられた。さらにin vitro transcription assayを用い,抗NOR-90抗体陽性患者血清から抽出したIgGによるリボソームRNAの転写抑制能を調べたが,抗RNA polymerase I抗体に比し,抑制能が弱い可能性が示唆された。エピトープ反応性と転写抑制能との関連は明らかではなかった。ただし,血清中に含まれる抗NOR-90抗体の濃度が抗RNA polymerase I抗体に比し低い可能性が考えられるため,抽出したIgG濃度を濃縮(または希釈)し,転写抑制能の変化を確認する予定である。

Last year, the applicant used the full-length hUBF full-length cDNA (NOR2.8), fusion protein を発appears, Western The blot method was used to detect anti-NOR-90 antibodies in the serum of patients with sexual diseases. As a result, 9 out of 91 cases had anti-NOR-90 antibodies.うち4 cases of chronic joint リウマチ, 3 cases of hydermia を有していたが, duplicate cases もcontaining 7 cases of がシェ-グレン syndromeとdiagnosisされており, Omiにおけるpast reportとはdifferentなるRESULTSがgetられた. This year, はNOR2.8をさらにlimited enzyme (Sau3Al) was processed, 5つのisoなるcDNA fragment was obtained, and そのうちの3つの was repeated The cDNA expression product (fusion protein) of しないcDNA is an ELISA antigen, and the patient's serum is related to the field of ELISA and is being pursued. The specific DNA binding site on the hUBF molecule is the specific regulatory factor, hSL1, and the interaction site. The main reason is that the DNA binding site contains the same DNA, and the specific DNA binding site has a higher resistance than the other site, and the DNA binding site is higher than the original site.なおpositive patientsが不だa fewであるため,エピトープreflexive and clinical symptomsとのmeaningなrelatedは见いださなかったが, patients with ankylosing disorderシェ-グレン syndrome Syndrome patients have many symptoms of reactive nature. In vitro transcription assay is used, anti-NOR-90 antibody positive patient serum is extracted, IgG is extracted, RNA is inhibited, and anti-RNA polymerase is used I-antibodies are not as strong as each other, and their inhibitory ability is weak.エピトープReflexivity と転WRITE Suppression Energy とのrelated は明らかではなかった.ただし, the concentration of まれるanti-NOR-90 antibody in the serum and the anti-RNA polymerase There is a possibility that the I antibody is lower than that of the antibody, and the concentration of the IgG is extracted and concentrated, and the inhibitory effect is confirmed and confirmed.