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ウイスル性スーパー抗原による自己免疫疾患発症の機構解明

阐明病毒超抗原引起的自身免疫性疾病发病机制

基本信息

批准号：
07770347
负责人：
中野英樹
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Toho University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770347/
关键词：
スーパー抗原マウス乳癌ウイルス自己免疫抗原提示 H-2^<sx1>MHC ClassII I-A I-E

项目摘要

内在性マウス乳癌ウイルスMtv-2由来スーパー抗原(SAg)の提示能力のあるDDD/1(H-2^<sx1>,I-A^<sx>)及び、提示能力のないB10.S(H-2^s,I-2^s)マウスのI-A_α及びI-A_βのcDNAをRT-PCR法によりクローニングした。I-A_αの塩基配列を調べた結果、I-A_α^sに比してI-A_α^<sx>では、T_<194>がCに、C_<495>がTに変異していたが、アミノ酸配列はsとsxで差がなく、I-A_α^sのアミノ酸配列は既知のものと一致した。従って、I-A_α^<sx>の構造はI-A_α^sと同一であると考えられた。I-A_β^<sx>の塩基配列は、G_<253>がCに変異しており、その結果、Ala_<85>がProに変異していた。I-A_<β28-123>はD1領域と呼ばれる抗原結合部位であり、各MHC間で高い多型性が見られる。しかし、Ala_<85>はマウスのI-A、I-E及びヒトのHLA DR等全てのMHC ClassII_β分子で保存されている。興味深いことに、Mtv-2と構造を同じくする外来性MMTV(GR)由来SAgを低い活性ながら提示できると報告されているI-A_β^fはPro_<83>がSerに、I-A_β^<NOD>はPro_<83>とAsp_<84>がそれぞれHisとSerに変異している。さらに、I-A_βではTyr_<87>であるのに対して、I-E_βではAsnと両者間で異なっている。以上の結果から、Class II_<β83-87>付近の構造がMtv由来SAgの提示に関与している可能性が示唆された。I-A分子のSAg提示能を調べるため、I-A_α及びI-A_βのcDNAをサイトメガロウイルスのプロモーターを有する発現ベクター(pcDNAIneo)にサブクローニングし、L cellにCo-transfectした。2日後に細胞表面上のI-A分子の発現をflow cytometryによって確認したところ、低レベルの発現が観察された。L cell transfectantにさらにMtv-2SAgcDNAをtransfectし、Vβ15^+T cell hybridoma(KOX15-8.3)とCo-cultureし、その上清中のIL-2量を測定したが、IL-2は検出されなかった。Positive controlとして用いたI-E^k-L cell transfectant(DCEK)は、Mtv-2SAgを提示した。L cellでのI-A遺伝子の発現は、一過性よりも恒常的である方がよい結果が得られると考えられるので、現在、I-A分子を恒常的に高発現する株を作製中である。今後も引き続きI-A分子の構造とSAg提示能について追究する予定である。

DDD/1(H-2^<sx1>,I-A^<sx>) and I-A ^(H-2 ^s, I-2 ^s) were detected by RT-PCR for the cDNA of intrinsic breast cancer Mtv-2 origin antigen (SAg). I-A_α_s<sx><194>_<495>I-A_α <sx>^s is the same as I-A_α^s. I-A_β <sx><253><85>^ I-A_<β28-123> is the antigen-binding site of D1 domain, and the high polymorphism among MHC is the same. All <85>MHC Class II_β molecules of I-A, I-E and HLA DR are preserved. The origin of exotic MMTV(GR) is SAg. The activity of MMTV(GR) is low. I-A_β^f is Pro_Ser. I-A_β^f is Pro_Asp. I-A_β^<83><NOD>f is Pro_<83><84>Asp. I-A_β is different from Tyr_<87>β. The above results show that the structure close to Class II_<β83-87> is related to the possibility of Mtv origin SAg. The SAg display capabilities of I-A molecules can be adjusted, and the cDNA of I-A_α and I-A_β can be used as a support device for mobile devices. This enables the development of web-based services for pcDNAineo and Co-transfer for L cells. 2 days later, the expression of I-A molecules on the cell surface was confirmed by flow cytometry. IL-2 was detected in the supernatant of L cell transfected Mtv-2SAg cDNA, Vβ15^+T cell hybridoma(KOX15-8.3) and Co-culture. Positive control is indicated by I-E^k-L cell transferase (DCEK). The expression of I-A molecules in L cells was transient, stable, and stable. The results showed that the expression of I-A molecules in L cells was stable and high. In the future, the structure of I-A molecules can be investigated.