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心筋細胞ムスカリン性カリウムチャネルのKineticsの研究(アロステリック理論モデルによる検討)

心肌细胞毒蕈碱钾通道动力学研究（变构理论模型检验）

基本信息

批准号：
07770492
负责人：
細谷幸雄
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Yamagata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.モルモット単一心房筋細胞でinside-out patch clampを行い、細胞外膜側のアセチルコリンの濃度を一定にして細胞内膜側のGTP濃度を変化させ、活性化Gタンパク量を変えた時のムスカリン性カリウム(K_<ACh>)チャネルのPatch電流を記録した。2.K_<ACh>チャネルのKineticsはClose(2)【double arrow】Close(1)【double arrow】Openの速いgatingとUnavailable【double arrow】Availableの遅いtransitionの2つの独立したtransitionからなると考えられた。3.各GTP濃度のデータに対し高速フーリエ変換を行いパワースペクトラムを加算平均しLorentzian curveでfittingを行った。Powerspectrumは2つのLorentzian curveの和でfittingできた。GTP濃度を変化させても2つのcorner frequencyに有意な変化はなかった。4.Close(2)【double arrow】Close(1)【double arrow】Openの速いgatingの各rate constantはGTP濃度を変えても有意な変化はないが、一方Unavailable【double arrow】Availableの遅いtransitionのrate constantはGTPの濃度を上げると有意に変化した。細胞内GTP濃度とK_<ACh>チャネル活性の濃度活性曲線のHill係数は2.6で正の協同性が認められた。5.Monodらのアロステリック理論モデルを用い濃度活性曲線のfittingを行ない、チャネルサブユニットの数が4個以上の時に良好にfittingできた。6.以上よりClose(2)【double arrow】Close(1)【double arrow】Openの間の反応は細胞内GTP濃度とは独立しており、GTPはUnavailable【double arrow】Availableの間の反応の平衡を変化させることにより開口確率を上昇させると考えられた。GタンパクによるK_<ACh>チャネルの活性化過程はアロステリック理論モデルでうまく説明できた。

1. The Patch current of the isolated atrial muscle cells was recorded when the inside-out patch clamp was applied, the concentration of GTP on the outer membrane side was kept constant, and the concentration of GTP on the inner membrane side was changed, and the amount of activated <ACh>GTP was changed. 2. K_<ACh>Close(2)[double arrow] Close(1)[double arrow] Open no speed gating Unavailable [double arrow] Available no transition no 2 no independence transition no examination no 3. The average Lorentzian curve of each GTP concentration is calculated by changing the curve. Powerspectrum 2 о Lorentzian curve о and fitting. GTP concentration changes with 2 or more corner frequencies. 4. Close (2)[double arrow] Close(1)[double arrow] Open speed changing of each rate constant of GTP concentration is intentionally changed, one party is Unavailable [double arrow] Available speed changing of each rate constant of GTP concentration is intentionally changed. The <ACh>Hill coefficient of concentration-activity curve between intracellular GTP concentration and K_(2 +) activity was 2.6. 5. The number of monod activity curves is more than 4 and the fitting is good. 6. Close(2)[double arrow] Close(1)[double arrow] Open intermittent reverse intracellular GTP concentration [double arrow] Available intermittent reverse balance [double arrow] Open intermittent reverse balance [double arrow] Open intermittent reverse intracellular GTP concentration [double arrow] Open intermittent reverse balance [double arrow [double arrow] Open accurate rate [double arrow] Open intermittent reverse balance [double arrow [double arrow] Open intermittent reverse balance [double arrow [double arrow] Open intermittent reverse balance [double arrow [double arrow [double arrow] The <ACh>activation process of the G_C_C_C.