血管内皮細胞カドヘリンの同定とバリアー機能における役割

血管内皮细胞钙粘蛋白的鉴定及其在屏障功能中的作用

• 批准号: 07770663
• 负责人: 松吉 徳久
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770663/
• 关键词: 血管内皮細胞; カドヘリン; マウスカドヘリン5; 細胞間接着分子; 管腔構造; 透過性

我々は抗血管内皮細胞カドヘリモノクローナル抗体を硫酸アンモニウム沈澱法により精製、濃縮した。そして、それを用いて抗体の認識する抗原のcDNA配列を決定した。抗原は784アミノ酸よりなり、ヒトカドヘリン5と高い相同性を示した。そこで我々の作成したモノクローナル抗体の抗原をマウスカドヘリン5と命名した。我々が単離したcDNAをL細胞に遺伝子導入すると細胞は接着性を獲得し、抗体により細胞間が染まるようになった。これらの実験結果より、このcDNAが作製した抗体の認識する抗原をコードしていることが証明された。また、抗体を用いてマウスカドヘリン5の分布を検討した結果、血管内皮細胞特異的に細胞間に分布していることがわかった。この抗体の機能阻害活性を利用して以下のような実験を行いマウスカドヘリン5の機能を調べた。血管内皮細胞株(F-2)をマトリゲルの上で培養すると管腔構造を形成する。そこでマウスカドヘリン5の機能を抗体により阻害し、どのような変化が生じるかを調べたところ、F-2細胞は管腔構造を形成せずマトリゲルの上で単層のまま増殖した。この事はマウスカドヘリン5が管腔構造形成に必須の分子であることを示唆した。また胞間の透過性を調べた結果、マウスカドヘリン5は血管内皮細胞間のHRPの透過性制御に重要な役割を担っていることがわかった。以上より我々が作成した抗血管内皮細胞カドヘリン抗体はマウスカドヘリン5を認識しており、またマウスカドヘリン5は単なる細胞間の接着のみならず、血管の管腔構造形成や透過性といった重要な働きに関与していることがわかった。

I 々 は anti endothelial cells カ ド ヘ リ モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody を sulfate ア ン モ ニ ウ ム precipitates method に よ り refined, concentrated し た. Youdaoplaceholder0 て, それを recognize する antigen, <s:1> cDNA coordination を to determine た た. Antigen ア 784ア ノ acid よ よ な <e:1> ヒトカドヘリ ヒトカドヘリ 5と high ア similarity を indicates た た. そ こ で I 々 の made し た モ ノ ク ロ ー ナ の ル antibody antigen を マ ウ ス カ ド ヘ リ ン 5 と named し た. I 々 が 単 from し た cDNA を L cells に heritage 伝 son import す る と cell は then を し, antibody に よ り intercellular が dye ま る よ う に な っ た. こ れ ら の be 験 results よ り, こ の cDNA が cropping し た antibody の know す る antigen を コ ー ド し て い る こ と が prove さ れ た. ま た, antibody を い て マ ウ ス カ ド ヘ リ ン 5 の distribution を beg し 検 た results, vascular endothelial cells specific に に distribution between し て い る こ と が わ か っ た. The inhibitory activity of the <s:1> antibody <e:1> function is を. The <s:1> ような experiment を is carried out using the て て and the following <s:1> ような experiment を. The <s:1> ウスカドヘリ ウスカドヘリ function を is adjusted to べた. The vascular endothelial cell line (F-2) is を を トリゲ トリゲ トリゲ すると で cultured すると lumen structure を to form する. そ こ で マ ウ ス カ ド ヘ リ ン 5 の function を antibody に よ り resistance against し, ど の よ う な variations change が raw じ る か を adjustable べ た と こ ろ を は lumen, F - 2 cells structure formation せ ず マ ト リ ゲ ル の on で 単 layer の ま ま raised colonization し た. The formation of the <s:1> lumen structure に must be induced by <s:1> molecules である た とを とを とを. Permeability を adjustable べ ま た intercellular の た results, マ ウ ス カ ド ヘ リ ン 5 は between endothelial cells の HRP の through sexual suppression に cut を bear important な service っ て い る こ と が わ か っ た. Above よ り I 々 が made し た anti endothelial cells カ ド ヘ リ ン antibody は マ ウ ス カ ド ヘ リ ン 5 を know し て お り, ま た マ ウ ス カ ド ヘ リ ン 5 は 単 な る intercellular の then の み な ら ず, blood vessels, の lumen や structure formation permeability と い っ た important な 働 き に masato and し て い る こ と が わ か っ た.

项目成果

Shibamoto S.: "Association of p120, a tyrosin kinase substrate. , with E-cadnerin/catenin complexes." Journal of Cell Biology. 128. 949-957 (1995)

Shibamoto S.：“p120（一种酪氨酸激酶底物）与 E-cadnerin/catenin 复合物的关联。”