皮膚悪性黒色腫の転移機構におけるカドヘリンの役割

钙粘蛋白在皮肤恶性黑色素瘤转移机制中的作用

• 批准号: 09770629
• 负责人: 松吉 徳久
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770629/
• 关键词: 黒色腫; カドヘリン; プロトカドヘリン; 細胞間接着

まず最初に、悪性黒色腫細胞がどのようなタイプのカドヘリンが発現しているかを調べた。正常培養メラノサイトと2種類の悪性黒色腫細胞株(MeWO,A375)からmRNAを抽出し、それを鋳型としてcDNAを作製した。degenerate PCR法によりこれらの細胞が発現しているカドヘリンを単離した。プライマーとしてはクラシカルカドヘリンとプロトカドヘリンの双方がアニールするdegenerateプライマーを用いた。単離したPCR断片の塩基配列をすべて調べたところ、4種類の既知のカドヘリンと6種類の未知のカドヘリン分子が発現していることがわかった。同定した4種類の既知のカドヘリンのうち3種類はクラシカルカドヘリンと呼ばれるファミリーに属するものであり、1種類はプロトカドヘリンファミリーに属するカドヘリン分子であった。これら単離した合計10種類のカドヘリン分子の発現をRT-PCR法により比較検討した結果、新しく見つけたカドヘリンであるカドヘリンME1、カドヘリンME2、カドヘリンME3、カドヘリンME4の4種類が悪性黒色腫細胞の細胞間接着に重要である可能性が示唆された。同定したPCR断片の大きさは約450bpであったので、それらの塩基配列を利用して、5'RACE法および3'RACE法によりcDNAの全長を現在、解明しつつある。現在のところ、これらのカドヘリンは細胞外領域を5個以上有するプロトカドヘリンのファミリーである可能性が塩基配列より強く示唆されている。また、同定されつつある分子を発現ベクターに組み込み、融合タンパクを作成し、モノクローナル抗体を作成する準備中である。

In the beginning, black cells appeared in the middle of the cell cycle. In normal culture, two kinds of black tumor cell lines (MeWO,A375) were isolated and cDNA was produced. Degenerate PCR is a method for detecting the presence of DNA in cells. The two sides of the road are facing each other. The sequence of PCR fragments was modified, 4 species were known, and 6 species were unknown. There are 4 kinds of known species in the same category, 3 kinds of known species in the same category, 1 kind of known species in the same category. A total of 10 different species were detected by RT-PCR. The results of comparative analysis showed that there were four different species of ME1, ME2, ME3 and ME4, which were important for the development of intercellular melanoma. The length of the cDNA fragment is about 450bp, and the nucleotide sequence of the cDNA fragment is determined by 5'RACE and 3'RACE methods. Now, there are more than 5 different types of DNA in the extracellular domain. In preparation for molecular discovery, fusion, and antibody creation,

项目成果

N.Matsuyoshi et.al.: "Multiple Cadherins Are Expressed in Human Fibroblasts" Biochemical and Biophysical Research Communications. 235. 355-358 (1997)

N.Matsuyoshi 等人：“人类成纤维细胞中表达多种钙粘蛋白”生物化学和生物物理研究通讯。

N.Matsuyoshi et.al.: "Identification of Novel Cadherins Expressed in Human Melanoma Cells." The Journal of Investigative Dermatology. 108(6). 908-913 (1997)

N.Matsuyoshi 等人：“人类黑色素瘤细胞中表达的新型钙粘蛋白的鉴定”。

N.Matsuyosi et.Al.: "In Vivo Evidence of the Critical Role of Cadherin・5 in Murine Vascular Integrity" Proceedings of the Association of American Physicians. 109. 362-371 (1997)

N.Matsuyosi 等人：“钙粘蛋白·5 在小鼠血管完整性中的关键作用的体内证据”美国医师协会会议记录 109. 362-371 (1997)。