メチシリン耐性黄色ぶどう球菌の迅速診断法の開発-薬剤耐性および毒素産生性の遺伝子診断-

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌快速诊断方法的开发 - 耐药性和产毒性的基因诊断 -

• 批准号: 07771232
• 负责人: 藤野 裕士
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771232/
• 关键词: MRSA; 院内感染; 集中治療; mecA遺伝子

[目的]メチシリン耐性黄色ぶどう球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus;MRSA)は院内感染の原因菌として重要であり、また集中治療医学の領域においても、免疫力の低下した患者には、重症の全身性感染症をひきおこし臨床的に大きな問題である。従ってMRSA感染症迅速診断法の開発を試みる。[方法]ブドウ球菌のメチシリン耐性遺伝子であるmecAおよびスーパー抗原TSST-1産生に対する遺伝子tstの遺伝子配列より選んだ25-30残基よりなる配列をDNA sythesizerで作成し、側鎖を持ったdeoxyuridineで1残基を置換し、側鎖にALPを結合させることにより酵素標識オリゴヌクレオチドプローブ(Enzyme-labeled Oligonucleotide Probe:ELONP)を作成した。ELONP法は材料としては臨床検体より分離培養された寒天培地上のコロニーおよび患者検体(血液、便、喀痰)を用いた。コロニーおよび患者検体を少量ニトロセルロース膜に塗布し、熱とアルカリ処理にて溶菌し、一本鎖となったDNAを膜に定着させる。これにmecAとtstそれぞれに対するALP標識プローブをhybridizationした後、ALP基質を加えて発色でmecAおよびtstの有無を判定した。[結果および考察]mecA-ELONPは従来法であるMICと高い相関を示した。また、tst-ELONPは従来法であるラテックス法と高い相関を示した。判定に必要な時間はともに従来法の50%以下であった。したっがてELONPによる高度病原性ブドウ球菌の迅速診断は臨床的価値があると考えられる。

[Objective] Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) is an important cause of nosocomial infection in the field of intensive treatment of patients with low immunity and severe systemic infections. The development of MRSA rapid diagnosis method was studied. [Methods] The gene sequence of Tst gene in the resistant gene of Bacillus sp. was constructed by DNA sythesizer with residues 25-30, substitution of deoxyuridine residue 1 and ALP binding with side-lock, and enzyme labeling (Enzyme-labeled Oligonucleotide Probe:ELONP). The ELONP method is used to isolate and culture materials from clinical specimens and patient specimens (blood, feces, sputum). A small amount of DNA was deposited on the surface of the patient's body. The presence or absence of mecA and tst is determined after the hybridization of ALP matrix. [Results]mecA-ELONP is a highly relevant tool. TST-ELONP is the most effective way to improve the quality of products. The time required for determination is less than 50%. The rapid diagnosis of highly pathogenic bacteria in ELONP is clinically important.