タンパク質間相互作用の一分子くり返し計測

蛋白质-蛋白质相互作用的重复单分子测量

• 批准号: 08458213
• 负责人: 石渡 信一
• 金额: $ 4.61万
• 依托单位: Waseda University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08458213/
• 关键词: レーザー光ピンセット; アクチンフィラメント; ミオシン; スペクトリン; 1分子結合力; 顕微計測; 生体分子モーター; 顕微操作; 温度パルス顕微鏡; pN,nm顕微解析; アクトミオシン硬直結合; 双頭結合,単頭結合

(1)アクチンフィラメントの後端に結合した直径1μmのポリスチレンビーズを、レーザー光ピンセットによって顕微操作し、アクチンフィラメントとアクチン結合性タンパク質との間の分子間結合に負荷を加え、結合の破断力などを繰り返し顕微計測することができる方法を、この数年間で我々は確立した。この方法を、アクチンフィラメントとスペクトリン(赤血球の裏打ちタンパク質の一種)との1分子結合(破断)力の計測に応用した。その結果、予備的実験ではあるが、結合の破断力として、平均3pNという値が得られた。これは、アクチンフィラメントとミオシン間の硬直結合力(平均9pN)や、α-アクチニンとの結合力(平均15pN)と比べて有意に小さい。(2)アクチンフィラメントとミオシン(HMM)分子間の硬直結合の破断力の測定については、単頭のHMMを調製して双頭のHMMと比較した。その結果、単頭HMMの破断力の分布は約7pNにピークを持つのに対して、双頭HMMでは数pNから20pNにわたる広い分布を示した。(7pNと10数pNとに2つのピークをもつ)。このことから、アクチンとHMM分子との結合力は、単頭と双頭とで約2倍異なることが示唆された。(3)アクチン分子を、蛋白分解酵素Subtilisinで処理すると、アクチンSubdomain2が2カ所で限定分解される(質量分析とペプチドシークエンサーによって切断箇所を同定した)が、そのことによって、HMM分子による滑り速度と滑り力が約20%に減少した。ところが、硬直結合の破断力は70%程度にしか低下しなかった。このことから、アクチンのsubdomain2は、ATP存在下での滑り機能に重要な役割を演じているが、ATP非存在下での硬直結合にはそれほど関与していないことが推論された。

(1) the rear end of the device is combined with the diameter of 1 μ m, the diameter of the device is 1 μ m, the diameter of the device is 1 μ m, the rear end of the device is combined with the diameter of 1 μ m, the back end of the device is combined with the diameter of 1 μ m, the combination of the device, the combination of the device, the combination of the two components, the combination of the load, the combination of the breaking force, the method of the microcontroller, the method of the microcontroller, and the method of the microcontroller. We have been asked to make sure that we have made sure that we have established a budget for several years. The method of combining (breaking) the molecular weight of red blood cell (RBC) with (breaking) molecular weight was used in the calculation of the force. The result of the test, the accuracy of the equipment, the combination of the breaking force, and the average 3pN performance. The combined force (average 9pN) and alpha-strength (average 15pN) of the two groups were lower than those of the control group. (2) to determine the performance of HMM by means of the combination of intermolecular hardness and breaking force to determine the performance of HMM and HMM. The result of the test, the HMM breaking force distribution, the 7pN breakage force distribution, the double HMM breakage, the 20pN breakage, the distribution, the results, the distribution of the breaking force, the distribution of the breaking force. (7pN

项目成果

Y.C. Sasaki et al.: "Two-Dimonsional Arrangement of a Functional Protein by Cysteine-Gold Intaraction : Enzyme Activity and Charactorization of a Protein Monolayer" Biophys. J.72・4. 1842-1848 (1997)

Y.C. Sasaki 等人：“半胱氨酸-金相互作用的功能性蛋白质的二维排列：蛋白质单层的酶活性和表征”Biophys.72-1848。

H. Fujita & S. Ishiwata: "Confractilidy and its regulation of this filament-reconstituted condiac musch fibres-muntigadon of the role of regulatory proteins in spontaucono feujion osullation" J. Musch Res. Cell motil.18・4. 495- (1997)

H. Fujita & S. Ishiwata：“Confratilidy 及其对这种细丝重建的 condiac musch 纤维的调节 - 调节蛋白在 spontaucono feujion osullation 中的作用” J. Musch Res Cell motil.18・4。 ）

Moriyama,Y.: "Ca^<2+>-induced tenlion development in the staelcs of glycerinated volticelld conuallaria" Cell Motil.Cytoskel.34. 271-278 (1996)

Moriyama，Y.：“Ca ^ 2 诱导的甘油化伏胞菌茎中的肌腱发育”Cell Motil.Cytoskel.34。

S. Ishiwata et al.: "Interhead Distances in Myosin Attached to F-Achn Estimated by Fluorescena Energy Transfer Spectros copy" Biophys. J.73・2. 895-904 (1997)

S. Ishiwata 等人：“通过荧光能量转移光谱复制估计的肌球蛋白的间距”J.73·2（1997）。

石渡信一編: "生体分子モーターの仕組み" 共立出版, 214 (1997)

石渡真一主编：《生物分子马达的机制》Kyoritsu Shuppan，214（1997）