造血幹細胞を標的とした新たなレトロウイルスベクター系の作成

创建针对造血干细胞的新型逆转录病毒载体系统

• 批准号: 08671228
• 负责人: 伊藤 克彦
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08671228/
• 关键词: 遺伝子治療; 造血幹細胞; レトロウイルス; 転写活性; ベクター; モロニ-ウイルス; フレンドウイルス; LTR

本研究では、以下のことを目的として研究を行った。(1)まず、種々のレトロウイルスのLTRをサブクローニングして得たレポーター用プラスミドを、造血幹細胞株を用いて遺伝子発現を検定し、レトロウイルスベクターの基本骨格を確定する。(2)つぎに、ストローマ細胞を用いたウイルスパッケージング細胞を確立する。その結果、以上のような研究結果を得た。(1)造血幹細胞株においては、MoMuLV,myeloproliferative sarcoma virus(MPSV),PCC4-cell-passaged MPSV,malignant histiocytosis sarcoma virusのU3に比べて、spleen focus-forming virus(SFFVp)のU3により高いプロモーター活性が認められた。また、MPSVのleader領域にあるprimer binding site(PBS;tRNAPro)は、幼若な造血細胞株でのレトロウイルスの転写活性を抑制し、一過性のレポーター発現量を減少させたが、murine ES cell virus(MESV)のPBS(tRNAGlu)を用いれば、転写抑制が認められなかった。以上の結果より、SFFVpのLTRとMESVのleader領域とを組み合わせたベクターを作成した。このベクターを用いて幼若な造血細胞株での良好な遺伝子発現を確認中である。(2)パッケジングシグナル部分の欠損したヘルパーウイルスより、gag/polをコードする部分を得て、これを発現ベクターにクローニングした。また、env蛋白質をコードする部分を別個の発現ベクターにクローニングした。これらのプラスミドをストローマ細胞株(MS-5)に導入したウイルスパッケージング細胞を樹立中である。

The purpose of this study and the purpose of this study are as follows. (1)まず、kind of 々のレトロウイルスのLTR をサブクローニングして got たレポーター用プラスミドを, hematopoietic stem cell lines are used to determine the basic structure of the hematopoietic stem cell line and the basic bone structure of the レトロウイルスベクターの. (2) The つぎに, ストローマcell を is established with the いたウイルスパッケージングcell を. The results of the above research are obtained. (1) Hematopoietic stem cell strain においては, MoMuLV, myeloproliferative sarcoma virus (MPSV), PCC4-cell-passaged MPSV, malignant histiocytosis sarcoma virus のU3 に比べて, spleen focus-forming virus(SFFVp)のU3により高いプロモーターactivityがcognizeめられた.また、MPSVのleader field にあるprimer binding site(PBS;tRNAPro)は, Yowakana hematopoietic cell strain でのレトロウイルスの転activation inhibitionし, transient のレポーター発existing をreduceさせたが, murine ES cell Virus (MESV) and PBS (tRNAGlu) are used to inhibit the virus (MESV). The above results are made by SFFVp's LTR and MESV's leader field and the group's team. The company has confirmed that it is using a hematopoietic cell strain from a young and healthy cell line. (2) Part of the パッケジングシグナル part is missing, gag /polをコードする partiallyを得て、これを発行ベクターにクローニングした.また,envproteinをコードするpartをdifferentの発成ベクターにクローニングした. The これらのプラスミドをストローマ cell line (MS-5) was introduced into the したウイルスパッケージング cell line and established in である.

项目成果

K.Okumura et al.: "Expression of a novel isoform of Vav,Vav-T,containing a single Src homology 3 domain in murine testicular germ cells" Oncogene. (in press).

K.Okumura 等人：“Vav、Vav-T 的新型亚型在小鼠睾丸生殖细胞中的表达，包含单个 Src 同源 3 结构域”Oncogene。

K.Itoh et al.: "A novel hematopoietic multilineage clone,Myl-D-7,is stromal cell-dependent and supported by an alternative mechanismcs independent of stem cell factor/c-kit interaction" Blood. 87. 3218-3228 (1996)

K.Itoh 等人：“一种新型造血多谱系克隆，Myl-D-7，是基质细胞依赖性的，并由独立于干细胞因子/c-kit 相互作用的替代机制支持”血液。