FMEVタイプのレトロウイルス・ベクターの転写制御領域の解析

FMEV型逆转录病毒载体转录控制区分析

• 批准号: 12036212
• 负责人: 伊藤 克彦
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12036212/
• 关键词: レトロウイルス; ベクター

我々は、新たなレトロウイルス・ベクター(FMEVタイプ)を作成し、このベクターが、従来のモロニー白血病ウイルス(MoMLV)由来のベクター以上に効率よい遺伝子発現をもたらすことを確認してきた。この効率よい遺伝子発現をもたらす、フレンド赤白血病ウイルス(SFFVp)long terninal repeat(LTR)のU3領域を解析する中で、Upstream Control Region(UCR)に強いシス活性を見い出した。本研究では、このシス活性を持つエレメントの解析を進めることを目的とした。平成12年度は、以下のことを行った。(1)SFFVpのUCRの領域に部分欠失を導入した、各種のLTR配列を作成した。(2)FMEVタイプのレトロウイルスベクターに、これらのLTR、マーカーとして、マウスCD8、および、chloramphenicol acetyltransferase(CAT)を組み込んだプラスミドを作成した。(3)これらのプラスミドを、パッケージング細胞にトランスフェクトし、感染性のベクターを得た。(4)ベクターを、種々の標的細胞株に感染させ、2日後にマーカーの発現量を、フローサイトメーターや、CAT ELISAで測定した。(5)欠失部分とマーカーの発現量から、UCR領域に存在するシス活性を持つエレメントがベクターのシス活性を制御する領域であることを確認した。(6)この領域に結合する蛋白を同定してゆく予定である。

We are pleased to announce that the new FMEV (FMEV) has been created, and that the new FMEV (FMEV) has been confirmed. The high activity of the Upstream Control Region(UCR) in the analysis of U3 domain of SFFVp long ternal-repeat (LTR) is also observed. This study is aimed at the analysis of the activity of the enzyme. In the 12th year of Heisei, the following actions were taken. (1)SFFVp's UCR domain is partially missing, and various LTR arrangements are made. (2)FMEV is the most important enzyme in the production of chloramphenicol acetyltransferase(CAT). (3)This is the first time that a cell has been identified. (4)The target cell line was infected, and the amount of the virus was detected 2 days later. (5)The missing part is identified by the presence of activity in the UCR domain. (6)This domain binds to a predetermined number of proteins.

项目成果

Tatsami K. et al.: "Induction of tryptophan 2,3-Dioxygenase in the mouse endometrium during implautation"Biochem Biophys Res Commun. 274. 166-170 (2000)

Tatsami K.等人：“植入期间小鼠子宫内膜中色氨酸2,3-双加氧酶的诱导”Biochem Biophys Res Commun。

Tsuji T et al.: "Retroviral vector-mediated gene expression in human CD34+38-cells expanded in vitro : cis-elements of FMEV are superior to those of MoMLV"Hum Gene Ther. 11. 271-284 (2000)

Tsuji T 等人：“体外扩增的人 CD34 38 细胞中逆转录病毒载体介导的基因表达：FMEV 的顺式元件优于 MoMLV 的顺式元件”Hum Gene Ther。

Danno S et al.: "Decreased expression of mouse rbm3, a cold-shock protein, in sertoli cells of cryptorchid testis."Am J Pathol. 156. 1685-1692 (2000)

Danno S 等人：“隐睾睾丸支持细胞中小鼠 rbm3（一种冷休克蛋白）的表达降低。”Am J Pathol。