FMEVタイプのレトロウイルス・ベクターの転写制御領域の解析

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我々は、新たなレトロウイルス・ベクター(FMEVタイプ)を作成し、このベクターが、従来のモロニー白血病ウイルス(MoMLV)由来のベクター以上に効率よい遺伝子発現をもたらすことを確認してきた。この効率よい遺伝子発現をもたらす、フレンド赤白血病ウイルス(SFFVp)long terninal repeat(LTR)のU3領域を解析する中で、Upstream Control Region(UCR)に強いシス活性を見い出した。本研究では、このシス活性を持つエレメントの解析を進めることを目的とした。平成12年度は、以下のことを行った。(1)SFFVpのUCRの領域に部分欠失を導入した、各種のLTR配列を作成した。(2)FMEVタイプのレトロウイルスベクターに、これらのLTR、マーカーとして、マウスCD8、および、chloramphenicol acetyltransferase(CAT)を組み込んだプラスミドを作成した。(3)これらのプラスミドを、パッケージング細胞にトランスフェクトし、感染性のベクターを得た。(4)ベクターを、種々の標的細胞株に感染させ、2日後にマーカーの発現量を、フローサイトメーターや、CAT ELISAで測定した。(5)欠失部分とマーカーの発現量から、UCR領域に存在するシス活性を持つエレメントがベクターのシス活性を制御する領域であることを確認した。(6)この領域に結合する蛋白を同定してゆく予定である。