甲状腺腫瘍のテロメラーゼ活性とp21,Rb蛋白発現との関係

甲状腺肿瘤端粒酶活性与p21、Rb蛋白表达的关系

• 批准号: 08671371
• 负责人: 高橋 敬治
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08671371/
• 关键词: 甲状腺; テロメラーゼ; p21; Rb

1,p21およびRB蛋白の免疫組織学的検討乳頭癌38例、濾胞腺腫12例、非腫瘍性組織36例をPFA固定の後凍結切片を作製し、microwave処理を行った。SABC法にて染色した(一次抗体:抗ヒトp21マウスモノクローナル抗体,抗ヒトRBマウスモノクローナル抗体)。p21の陽性率は乳頭癌47%,濾胞腺腫33%,非腫瘍性組織14%であった。乳頭癌が非腫瘍性組織より有意に陽性率が高かった(p<0.01)。乳頭癌におけるp21陽性率と臨床所見(腫瘍径,甲状腺外浸潤,リンパ節転移)では、p21陽性例の9.4%にリンパ節転移を認めたが、p21陽性例のリンパ節転移は50%しか認められなかった(p<0.01)。RB蛋白の陽性率は乳頭癌26%,濾胞腺腫33%,非腫瘍性組織11%であった。腫瘍性病変(乳頭癌+濾胞腺腫)が非腫瘍性組織より陽性率が高い傾向を示した(p=0.06)。乳頭癌におけるRB陽性率と臨床所見を検討したが、有意な関係は認められなかった。乳頭癌におけるp21とRB蛋白の発現の関係を検討したが、両者間に相関はなく各々独立した因子と考えられた。2,甲状腺腫瘍のテロメラーゼ活性甲状腺腫瘍をhomogenizeし16000g遠心分離し、上清をsampleとして使用した。また継代培養された細胞株を陽性controlとした。sampleをRNase処理しかつ85℃10分反応させたものを陰性controlとした。TS primerをγ^<32>P-ATPでラベルし、CX primer,dNTP,Taq,TRAP buffer,Sampleを加えPCRを施行した。その後12%PAで電気泳動を行い、ladderの有無でテロメラーゼ活性を判定した。PCRのアニーリング温度を55℃,58℃,59℃と行ったが、陰性controlにも非特異的ladderがみられ、60℃では陽性controlにのみladderが見られた。甲状腺腫瘍のテロメラーゼ活性が弱いために高感度でなければ測定できないのか、実験系に問題があって甲状腺腫瘍のテロメラーゼ活性が測定できないのか検討中である。

1,p21 and RB protein were detected in 38 cases of papillary carcinoma, 12 cases of filter adenoma and 36 cases of non-cancerous tissues. Frozen sections were prepared after PFA fixation and microwave-treated. SABC staining (primary antibody: anti-p21 antibody, anti-RB antibody). The positive rate of p21 was 47% in papillary carcinoma, 33% in filtering adenoma and 14% in non-cancerous tissue. The positive rate of breast cancer was higher than that of non-cancerous tissue (p<0.01). The positive rate of p21 in papillary carcinoma was 9.4% and 50% respectively (p<0.01). RB protein positive rate was 26% in papillary carcinoma, 33% in filtering adenoma and 11% in non-cancerous tissue. The positive rate of tumorous diseases (papillary carcinoma + filter gland) tended to be higher than that of non-tumorous tissues (p=0.06). The breast cancer positive rate and clinical findings were discussed and the relationship between breast cancer and breast cancer was analyzed. The relationship between p21 and the expression of RB protein in papillary cancer has been discussed, and the correlation between them is independent of each other. 2. goiter homogenize 16000g of supernatant sample The cell lines were cultured and positive for control. The sample is processed by RNase at 85℃ for 10 minutes and is subject to negative control. TS primer γ^<32>P-ATP, CX primer,dNTP,Taq,TRAP buffer,Sample PCR After 12% PA, the electric mobility of the ladder is determined. PCR detection temperature: 55℃, 58 ℃, 59 ℃, negative control temperature: non-specific ladder temperature: 60℃, positive control temperature: 60℃. The activity of goiter is weak, the sensitivity is high, and the activity of goiter is low.