多機能型微小電極によるターゲット細胞の遺伝子発現制御

使用多功能微电极控制靶细胞中的基因表达

• 批准号: 10145209
• 负责人: 斉藤 美佳子
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tokyo University of Agriculture and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10145209/
• 关键词: 多機能型微小電極; ターゲット細胞; イネキチナーゼ

近年、生物機能の解析において、個々の細胞単位での計測・制御が重要になっている。このような解析は、細胞単位でシグナルを与えたり、また同時に個々の細胞からシグナルを得る技術が不可欠である。本研究は、具体的にストレス応答遺伝子であるイネキチナーゼ遺伝子を選び、イネ培養細胞の中の単一の細胞をターゲットし、このターゲット細胞におけるキチナーゼ遺伝子の発現制御を行うことを目的とした。本年度は、次の項目を実施した。1. イネ培養細胞への遺伝子導入と発現効率の解析:導入する遺伝子として、イネキチナーゼのプロモーターにグリーン蛍光タンパク(GFP)のcDNAを挿入したプラスミド(pCHI-GFP)を用いた。pCHI-GFPをターゲット細胞に導入した12時間後にエリシターを作用させ、更に1日後にGFPの蛍光を観察したところ、約22%の細胞からGFPの蛍光が観察された。2. ターゲット細胞のにおけるエリシターによるイネキチナーゼ遺伝子の発現解析:エリシターの作用する第一段階について解析を行った。pCHI-GFPを導入した細胞に、エリシターを細胞内部に直接導入したところ、全ての細胞においてGFPの蛍光は見られなかった。そこで、これらの細胞に対して、細胞外部からエリシターを作用させたところ、約7.6%の細胞からGFPの蛍光が見られた。これらのことから、エリシターの作用する第一段階は、直接細胞内に入って作用するわけではなく、原形質膜を介してシグナルが伝わると考えられた。

In recent years, the <s:1> analysis of biological functions にお にお て て and the measurement and control of 単 positions in 々 <s:1> cells で are が important になって る る る る る. こ の よ う な parsing は, cell 単 で シ グ ナ ル を and え た り, ま た while に 々 の cells か ら シ グ ナ ル を be る technology が owe it not で あ る. は of this research, concrete に ス ト レ ス 応 a heritage 伝 son で あ る イ ネ キ チ ナ ー ゼ heritage 伝 を choose び, イ ネ culture cell in の の 単 a の cells を タ ー ゲ ッ ト し, こ の タ ー ゲ ッ ト cells に お け る キ チ ナ ー ゼ heritage 伝 son の 発 system now ride on を う こ と を purpose と し た. The implementation of the を project in the current year is た. 1. イ ネ culture cell へ の posthumous son 伝 import と 発 の is sharper rate analytic: import す る posthumous son 伝 と し て, イ ネ キ チ ナ ー ゼ の プ ロ モ ー タ ー に グ リ ー ン 蛍 light タ ン パ ク (GFP) の cDNA を scions into し た プ ラ ス ミ ド (pCHI - GFP) を い た. PCHI - GFP を タ ー ゲ ッ ト cells に import し 12 time after た に エ リ シ タ ー を role さ せ, more に 1st に GFP の 蛍 light を 観 examine し た と こ ろ, about 22% の cell か ら GFP の 蛍 light が 観 examine さ れ た. 2. タ ー ゲ ッ ト cells の に お け る エ リ シ タ ー に よ る イ ネ キ チ ナ ー ゼ heritage 伝 son の 発 is analytic: エ リ シ タ ー の role す る first Duan Jie に つ い analytical line を っ て た. PCHI - GFP を import し た cell に, エ リ シ タ ー を intracellular に directly import し た と こ ろ, whole て の cells に お い て GFP の 蛍 は of light ら れ な か っ た. そ こ で, こ れ ら の cells に し seaborne て, outside of the cell か ら エ リ シ タ ー を role さ せ た と こ ろ, about 7.6% の cell か ら GFP の 蛍 が of light ら れ た. こ れ ら の こ と か ら, エ リ シ タ ー の role す る first Duan Jie は に, direct cell into っ て role す る わ け で は な く base, plasma membrane を interface し て シ グ ナ ル が 伝 わ る と exam え ら れ た.

项目成果

Hidekazu Sotoyama: "In Vivo Measurement of the Electrical Impedance of Cell Membranes of TObacco Cultured Cells with a Multifunctional Microelectrode System." Bioelectrochem.Bioenerg.45(1). 83-92 (1998)

Hidekazu Sotoyama：“使用多功能微电极系统体内测量烟草培养细胞细胞膜的电阻抗。”

Hidekazu Sotoyama: "Control of the Cross Membrane Potential of a Cultured Tobacco Cell and Simultaneous Measurement of the Electrical Impedance of Its Membrane." Electrochemistry. 67(1). 18-21 (1999)

Hidekazu Sotoyama：“控制培养烟草细胞的跨膜电位并同时测量其膜的电阻抗。”

Hideaki Matsuoka: "Use of a Microelectrode System as a Tool of the Quantitative Application of Wound to the Cell-to-Cell Junctional Membrane of Cultured Tobacco Cells." Denki Kagaku. 66(5). 532-536 (1998)

Hideaki Matsuoka：“使用微电极系统作为定量应用伤口到培养的烟草细胞的细胞间连接膜的工具。”

Hideaki Matsuoka: "Control of the Quantity and the Timing of Microinjection into a Bio-Cell with a Multifunctional Microelectrode." Electrochim.Acta. (in press). (1999)

Hideaki Matsuoka：“用多功能微电极控制生物细胞显微注射的数量和时间。”