权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

新規レポーター遺伝子による細胞内情報変換システムの解析

使用新报告基因分析细胞内信息转换系统

基本信息

批准号：
11750683
负责人：
斉藤美佳子
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11750683/
关键词：
レポーター遺伝子細胞内情報伝達ストレス応答性遺伝子

项目摘要

本研究は、イネ培養細胞を用い、その化学的、物理的あるいは生物学的ストレスシグナルに対して発現する遺伝子を具体的な対象遺伝子とし、この遺伝子発現を指標として,細胞内情報変換のリアルタイム解析を目標としている。本年度は最終年度であり、安定した微小電極作製の技術の向上と、蛍光物質導入による細胞状態の可視化について解析した。具体的な項目を以下に示す。1.細胞内遺伝子導入量の定量化:従来用いていた微小電極による遺伝子導入には、どのくらいの遺伝子量が導入できたのかということは全く不明であった。そのために、遺伝子を発現する細胞の率が極めて低かった。そこで、あらかじめプラスミドDNAとPIを結合させたものを微小電極の中に充填し、シリコンオイル中に作っておいた水滴中に、電気泳動的に導入した。その結果、電圧を印加し続けると、DNAが導入され、印加を停止するとDNAの導入も停止するという、いわゆるON-OFFが観察された。また、導入されたDNA量は、印加する電圧の強さに依存することもわかった。その量は、5V、5分間印加で約100pgであった。2.蛍光物質導入による細胞状態の可視化:GFPの細胞内滞留の問題を解決するには至らなかったが、細胞応答として、[Ca^<2+>]i変化、代謝変化、遺伝子発現といった一連の反応を考え、それぞれの変化を蛍光標識化合物で観察することとした。その結果、[Ca^<2+>]iの変化にはFluo-3を、代謝変化には、グルコースならば、当研究室で開発された蛍光グルコースを用いた場合、新しいイメージスライサー型顕微分光システムを用いることで、GFPと蛍光波長が近いものでも、細胞応答を分光学的に解析することが可能であることがわかった。

This study focuses on the application, chemical and physical aspects of cell culture, as well as biological aspects of cell culture. This year marks the end of the year for the advancement of microelectrode manufacturing technology, the introduction of fluorescent substances, and the visualization and analysis of cell states. Specific items are shown below. 1. Quantification of intracellular gene introduction: the amount of gene introduced into the cell is unknown. The rate of cell development is extremely low. In addition, the DNA and PI of the microelectrodes are filled with water droplets and electrophoresis is introduced. The result is that the voltage is applied, the DNA is introduced, the DNA is stopped, and the ON-OFF is detected. The amount of DNA introduced is dependent on the voltage. The amount of, 5V, 5 minutes Inca about 100pg. 2. Visualization of cell status during introduction of fluorescent substances: problems of GFP intracellular retention are solved, cellular responses,[Ca^<2+>]i transformation, metabolic transformation, gene development, and continuous reverse transcription, and detection of fluorescent labeling compounds. Results: [Ca^<2+>]i is transformed into Fluo-3, Metabolic transformation, Cell transformation, and when the laboratory is opened, it is possible to analyze Fluo-3, Cell transformation, and Cell transformation.