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増殖因子受容体の機能阻害による精子分化制御機構解析

抑制生长因子受体功能控制精子分化的机制分析

基本信息

批准号：
10160216
负责人：
高宗和史
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

cDNAを得ることによりアフリカツメガエル(Xenopus laevis)精巣での存在が明らかになった6種の増殖因子受容体(c-kit、IGFIR、PDGFRα、FGFR2、Xenopus eph receptorsubfamily、flk)のうち、マウスやラットでも精巣での存在が確かめられているc-kit、IGF1R.PDGFRαに着目し、これらの細胞外ドメインを認識する抗体を作成することにした。c-kitに対するcDNAは、タンパク質をコードする領域全体を含んでいなかったため、新たに作成したcDNAライブラリーより再選別を行い、新規のc-kitホモログ1種を含む計2種のcDNAクローンを得ることに成功した。2種ともほぼ全長を含んでいたので、これらcDNAを利用して細胞外ドメインを認識する機能阻害抗体を作成していく予定である。また、IGF1RとPDGFRαについては、既にcDNAの塩基配列についての報告があったので、この情報をもとに現在抗体作成中である。一方、イモリとウナギの精子形成において重要な役割が示唆されているactivinについても調べてみた。アフリカツメガエルのactivin受容体に対するcDNAは、初期胚cDNAライブラリーより得られており、この情報をもとにRT-PCRで検索した結果、acitivin R1とactivin R2Bの精巣での存在を確認することに成功した。これら2種についても、抗体作成中である。この研究と平行して、体細胞分裂期から減数分裂期への分裂様式変換に伴って発現調節を受ける遺伝子の検索を行っていたところ、新規の遺伝子pXTO-1Tを見い出すことに成功した。この遺伝子がコードするタンパク質に対する抗体を作成し、その存在場所を調べたところ、第一精母細胞と第一卵母細胞に最も多く存在しており、減数分裂において重要な働きをしていることが予想された。卵母細胞への抗体の顕微注入は容易であるので、この方法を用いて機能阻害実験を行いpXTO-1Tタンパク質の機能を明らかにしていく予定である。

The presence of 6 kinds of growth factor receptors (c-kit, IGFIR, PDGFR α, FGFR2, Xenopus eph receptor subfamily, flk) in Xenopus laevis was detected by cDNA sequencing. The presence of 6 kinds of growth factor receptors (c-kit, IGFIR, PDGFRα, FGFR2, Xenopus eph receptor subfamily, flk) in Xenopus laevis was detected by cDNA sequencing. The presence of 6 kinds of growth factor receptors in Xenopus laevis was confirmed by c-kit, IGF1R. PDGFR α was detected by cDNA sequencing. c-kit for cDNA, C-kit for DNA, C-kit for DNA Two kinds of functional blocking antibodies were prepared by using cDNA, including full-length cDNA and extracellular cDNA. IGF1R and PDGFRα are reported in cDNA gene alignment and antibody production. In one aspect, the sperm formation process is very important, and the sperm production process is very important. RT-PCR was successfully performed to detect the presence of activin R1 and activin R2B in the cDNA library. Two kinds of antibodies are produced. This study was successful in parallel development, somatic division, meiotic division and pattern change, and in the development and regulation of gene expression. The new gene pXTO-1T was successfully developed. The first spermatocyte and the first oocyte are the most important cells in meiosis. The microinjection of antibodies into oocytes is easy, and the method of microinjection can be used to inhibit the function of pXTO-1T cells.