高度好熱菌蛋白質を用いたDNA修復機構の分子レベルでの解析

使用高度嗜热细菌蛋白对 DNA 修复机制进行分子水平分析

• 批准号: 10165213
• 负责人: 加藤 龍一
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10165213/
• 关键词: DNA修復; ミスマッチ修復; ヌクレオチド除去修復; 塩基除去修復; 組換え修復; X線結晶構造解析; 高度好熱菌; ドメイン構造

高度好熱菌RecAについで生化学的解析を行い大腸菌RecAと比較する事によって、DNA分子の相同的組換えに熱の及ぼす効果を見出した(Kato and Kuramitsu,Eur.J.Biochem.inpress)。また、高度好熱菌RecAを用いてその蛋白質の会合状態がカオトロピックイオンによって制御できることを見出し、異なる会合状態におけるRecAの性質について調べた(Masui et al.,Biochemistry37,14788-14797)。変性実験とプロテアーゼによる限定分解実験から、MutSは4つの構造ドメインからなると推定し、これらのドメインのうち中央部に位置するドメインが2本鎖DNAと相互作用する領域であることを示した(Tachiki et al.,Nucleic Acids Res.26,4153-4159)。また、これら構造ドメインの情報を元にして3つの断片化蛋白質を作成し、中央部のドメインが多量体形成能と2本鎖DNAへの非特異的な結合能を持つこと、及び、C末端ドメインがATP加水分解活性とミスマッチ特異的DNA結合能を持つことを示した(Tachiki et al.,in preparation)。また、溶液中でのMutSの会合状態をX線小角散乱を用いて測定した(Kato et al.in preparation)。さらに、単独およびADP共存下でMutSの結晶化に成功した。MutSと共にミスマッチ修復に関わるUvrD,MutLの大量発現系の構築と精製法の確立を行った(Kato et al.,in preparation:Shiba et al.,in preparation)。UvrA,Bと傷害DNAとの相互作用を蛍光DNAを用いて定量的に解析した(Yamagata et al.,in preparation)。また、UvrB(Shibata et al.,ActaCryst.D,in press;Nakagawa et al.,inpreraration)及びMutM(Sugahara et al.,in preparation)の結晶化を行い、現在着実にX線構造解析が進行中である。

Biochemical analysis of highly good bacteria RecA bacteria RecA strains are more sensitive than other bacteria, DNA molecules are the same and Kato and Kuramitsu,Eur.J.Biochem.inpress is the same. RecA, a high-quality bacterium, was used to rendezvous with protein, protein and protein. MutS

项目成果

Hidehisa Tachiki: "Domain Organization and functional analysis of Thermus thermophilus MutS protein" Nucleic Acids Res.26. 4153-4159 (1998)

Hidehisa Tachiki：“嗜热栖热菌 MutS 蛋白的结构域组织和功能分析”核酸 Res.26。

Akihiro Shibata: "Crystallization and preliminary X-ray diffraction studies of a DNA excision repair enzyme.UvrB.from Thermus thermophilus HB8" Acta Cryst,Sec.D. (in press). (1999)

Akihiro Shibata：“DNA 切除修复酶的结晶和初步 X 射线衍射研究。来自嗜热栖热菌 HB8 的 UvrB”Acta Cryst，Sec.D。

Yuko Nobe: "The novel substrate recognition mechanism utilized by aspartete aminotransferase of the extreme thermophile Thermus thermophilus HB8" J.Biol.Chem.273. 29554-29564 (1998)

Yuko Nobe：“极端嗜热菌 HB8 的天冬氨酸氨基转移酶利用的新型底物识别机制”J.Biol.Chem.273。

Tsutomu Mikawa: "Thermostable repair enzyme for oxidative DNA damage from extremely thermophilic bacterium, Thermus Thermophilus HB8" Nucleic Acids Res.26. 903-910 (1998)

Tsutomu Mikawa：“用于极端嗜热细菌，Thermus Thermophilus HB8 氧化 DNA 损伤的耐热修复酶”Nucleic Acids Res.26。

Ryuichi Kato: "Characterization of thermostable RecA protein and analysis of its interaction with single-stranded DNA" Eur.J.Biochem.(in press). (1999)

Ryuichi Kato：“热稳定性 RecA 蛋白的表征及其与单链 DNA 相互作用的分析”Eur.J.Biochem.（出版中）。