内因性プロテインキナーゼフォスファターゼによるイオンポンプ触媒鎖の可逆性リン酸化

内源蛋白激酶磷酸酶对离子泵催化链的可逆磷酸化

• 批准号: 10169202
• 负责人: 谷口 和弥
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10169202/
• 关键词: Naポンプ; Hポンプ; リン酸化; フォスファターゼ; キナーゼ; オリゴマー

H/K-ATPaseの末端の多重リン酸化に関して,関与するTyr-kinaseとSer-kinaseを免疫化学的手法で同定することに成功し又Tyr-phosphataseに関して新たな酵素で有る可能性が示唆された。さらに従来のin vitroで検出されていた、可逆的リン酸化が胃壁細胞で生じていることが明かにされた。多重リン酸化とP-typeATPasesのoligomer構造との関係を明かにするため膜Na/K-ATPase及びH/K-ATPaseの機能的単位が_-protomerを単位とするoligomer構造からなることを直接証明するための研究をおこなった。その結果、触媒鎖あたりのRbの結合はRb閉塞酵素、Mg,Naと低濃度ATPに依存するRb閉塞、Mg,Naと高濃度ATP存在下でのRb閉塞でそれぞれ2:1:0.5となった。ATPの最大結合量は高濃度のEDTA存在下で触媒鎖あたり0.75、ATPase反応中には、0.25に低下した。さらに興味深いことはATPase反応中の1/2の触媒鎖がリン酸化中間体を形成しているさい、1/4の触媒鎖にはATPが、他の1/4の触媒鎮にはADPとPiのいずれも酸に不安定な形で結合していることがはじめて明かにされたことである。これらの結果は、Na/K-ATPaseが4量体構造をとり、P-type ATPaseに共通の反応中間体EPと同時に筋収縮に関与するMyosin ATPaseと類似の反応中間体E-ADP-Piを形成することを初めて示したものである。同様な結果がH/K-ATPase、Ca-ATPaseでも生じている可能性が示唆され目下詳細を研究中である。

H/K - ATPase の end の multiple リ ン acidification に masato し て, masato and す る Tyr kinase - と Ser - kinase を set with immunochemical methods で す る こ と に し Tyr again success - phosphatase に masato し て new た な enzyme で る possibility が in stopping さ れ た. さ ら に 従 to の in vitro で 検 out さ れ て い た, reversible リ ン acidification が parietal cell で raw じ て い る こ と が Ming か に さ れ た. Multiple リ ン acidification と P - typeATPases の oligomer structure と の masato を and Ming か に す る た め membrane Na/K ATPase and び H/K - ATPase 単 の functionary who が _ - protomer を 単 a と す る oligomer structure か ら な る こ と を directly prove す る た め の research を お Youdaoplaceholder0 なった. そ の results, catalytic lock あ た り の Rb の は Rb block enzymes, Mg, Na と に low concentration of ATP dependent す る Rb occlusion, Mg, Na と で in the presence of high concentration of ATP の Rb occlusion で そ れ ぞ れ 2:1:0. 5 と な っ た. In the presence of a high concentration of <s:1> EDTA, the で catalyst lock あた <e:1> of 0.75 is present, and in the 応 of ATPase, に and 0.25に are low and <s:1> た are low. さ ら に tumblers deep い こ と は ATPase の 1/2 の catalyst in the 応 lock が リ ン acidification intermediates を form し て い る さ い, 1/4 の catalyst lock に は ATP が, 1/4 の catalyst town he の に は ADP と Pi の い ず れ も acid に unrest な form で し て い る こ と が は じ め て Ming か に さ れ た こ と で あ る. こ れ ら の results は, Na/K ATPase が 4 quantity body structure を と り, P -type ATPase に の against common 応 intermediates EP と に muscle at the same time 収 shrinkage に masato and す る Myosin ATPase と similar の E - ADP - Pi を 応 intermediates to form す る こ と を early め て in し た も の で あ る. Results with others in な が H/K - ATPase, Ca - ATPase で も raw じ て い が る possibility in stopping さ れ contains detailed を study で あ る.

项目成果

T.Tsuda: "ATP and Acetry Phosphate Induce Molecular Events near the ATP binding Site and the Membrane Domain of Na,K-ATPase." J.Biol.Chem.vol.273. 24339-24345 (1998)

T.Tsuda：“ATP 和乙酰磷酸在 ATP 结合位点和 Na,K-ATP 酶膜结构域附近诱导分子事件。”

T.Tsuda: "Half-site Modification of Lys-480 of the Na,K-ATPase α-Chain with Pyridoxal 5'-Diphospho-5'-adenosine Reduces ATP-dependent Phosphorylation Stoichiometry from Half to a Quarter" J.Biol.Chem.vol.273. 24334-24338 (1998)

T.Tsuda：“用吡哆醛 5-二磷酸-5-腺苷对 Na,K-ATP 酶 α 链的 Lys-480 进行半位点修饰，可将 ATP 依赖性磷酸化化学计量从一半减少到四分之一”J.Biol。化学卷273。24334-24338 (1998)

T.Imagawa: "Does Binding of Ouabain to Human α1 Subunit of Na,K-ATPase Affect the ATPase Activity of Adjacent Rat α1 Subunit?" Jpn.J.Pharmacal.vol.76. 415-423 (1998)

T.Imakawa：“哇巴因与人 Na,K-ATP 酶 α1 亚基的结合会影响相邻大鼠 α1 亚基的 ATP 酶活性吗？”Jpn.J.Pharmacal.vol.76 (1998)。

T.Tsuda: "Fluorescein 5'-Isothiocyanate-Modified Na,K-ATPase at Lys-501 of the α-Chain,Accepts ATP Independent of Pyridoxal 5'-Diphospho-5' Adenosine Modification at Lys-480." J.Biochem.vol.123. 169-174 (1998)

T.Tsuda：“α 链的 Lys-501 处的荧光素 5-异硫氰酸酯修饰的 Na,K-ATP 酶，在 J.Biochem 的 Lys-480 处接受独立于吡哆醛 5-二磷酸-5 腺苷修饰的 ATP。”第123卷169-174（1998）