イントロンレスRNAの核外輸送機構

无内含子RNA的核输出机制

• 批准号: 10174227
• 负责人: 木村 富紀
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10174227/
• 关键词: HBV; HBVPRE; イントロンレスRNA; HIV-1 Rev; CRMI; アクチン; RNA核外輸送

HIV-1 Rev蛋白の核外輸送シグナル(NES)に対応する細胞固有のRNA輸送機構を個々の細胞レベルで解析する目的で、Fluorescence in situ hybridizationに免疫蛍光染色を組み合わせ、ウイルス構造蛋白mRNA(RRE RNA)とRev或いはRNA輸送に関わる細胞因子が同一細胞において観察可能な実験系を構築した。同系を用いてRRE RNAの核外輸送を検討したところ、Rev-NESにおいてそのレセプターであるCRM1と、Ranが複合体を形成することにより核内にアクチン線維束が形成され、しかも核膜を超え細胞質と連絡するこの線維束に乗ってRcv-RNA複合体が核内外を結ぶ像が観察された。この線維束は免疫電顕的にも確認され、またCytochalasin B或いはLatrunculin Bを用いたFアクチンの脱重合によりRRE RNAの核外輸送が阻害された事から、Rev-NESに対応する細胞固有のRNA輸送機構としてアクチン線維束が関与している事が考えられた。このイントロンを含むRNAの核外輸送系がPREにより調節されるB型肝炎ウイルス(HBV)のイントロンレスRNA輸送への関与を知る目的で、HIVとHBV RNAの核外輸送系に共通の細胞因子が用いられる可能性を検討した。その結果、輸送に関わる細胞因子を特異的に吸着するヒト白血病ウイルスRex蛋白のドミナントネガティブ変異体はRev/RREとPRE輸送系に対し共に阻害効果を発揮したが、CRM1の共発現によりRNA輸送が代償されたのは前者の輸送系のみであった。またPRE RNAは核内において線状構造をとらず、アクチン線維束の形成も認められなかった。以上の結果から、HBV PREはCRM1とは異なる細胞因子の関与の下Rev/RRE輸送系とは別個の輸送系を介してHBVイントロンレスRNAを核外輸送すると結論づけた。

The expression of HIV-1 Rev protein in the extracellular transport pathway (NES) of the cell-specific RNA transport machinery was analyzed for the purpose of Fluorescence in situ hybridization, immunostaining, and construction of a possible system of cytokines involved in mRNA transport in the same cell. The study of extra-nuclear transport of RRE RNA by homologous genes, including CRM1 and Rcv-RNA complex formation, and the study of intra-nuclear transport of RRE RNA by homologous genes, including CRM1 and Rcv-RNA complex formation, and the study of intra-nuclear transport of RRE RNA by homologous genes. The expression of Cytochalasin B or Latrunculin B in the RNA gene was determined by PCR. The expression of Cytochalasin B or Latrunculin B in the RNA gene was determined by PCR. Objective To investigate the relationship between RNA delivery and PRE regulation in hepatitis B virus (HBV), and to explore the possibility of the use of cytokines common to HIV and HBV RNA delivery systems. The results of this study indicate that there is a correlation between cytokine specific uptake in leukemia and the development of a novel Rev/RRE and PRE delivery system, and the development of CRM1 and RNA delivery is compensated for by the development of a novel Rev/RRE delivery system. PRE RNA is a nuclear linear structure, and the formation of linear bundles is recognized. These results indicate that HBV PRE CRM1 is related to the development of Rev/RRE delivery system and that other delivery systems are involved in HBV PRE RNA exonucleation.

项目成果

木村富紀: "HIV RNAの核外輸送機構" 最新医学. 53・9. 23-28 (1998)

木村富典：“HIV RNA核输出机制”现代医学53・9（1998）。