HIV1- Rev蛋白によるウイルスmRNAの核外輸送と翻訳調節

HIV1-Rev 蛋白对病毒 mRNA 的核输出和翻译调节

• 批准号: 09258225
• 负责人: 木村 富紀
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09258225/
• 关键词: HIV-1 Rev; 核外輸送シグナル; 構造蛋白mRNA; アクチン; CRM1; Ran-GTPase; RNA核外輸送; 翻訳調節

HIV-1 Rev蛋白は、ウイルスmRNA上のRREに結合し、同蛋白上の核外輸送シグナル(NES)を介して構造蛋白(GagおよびEnv)mRNAの核外輸送を担う。我々はこれ迄に、蛍光in situ hybridization及び免疫蛍光染色法を用い、細胞質においてもRevが構造蛋白mRNAの翻訳に関与する可能性、及びこの翻訳調節にRev/ウイルスRNA複合体と細胞質β-アクチンとの会合が重要である事を示してきた。その過程で、核内においても、β-アクチンとRev/gagRNA複合体の共存が観察され、ウイルスRNAの核外輸送におけるβ-アクチンの関与が示唆された。そこで、核内におけるgagRNA及びRevの存在様式を詳細に検討した結果、両者は複合体として線状構造をとることが示され、更にこの線状構造に一致してβ-アクチンの存在が明らかとなった。このアクチン繊維束の形成は、Rev/gag RNA複合体の形成に依存しており、Rev-NES変異体を用いた場合は不完全であった。興味ある事に、このアクチン繊維束は核膜を超え細胞質アクチン繊維と連絡する像が観察され、又Cytochalasinによるアクチンの脱重合によりgagRNAの核外輸送が阻止されたことから、同繊維を介したウイルスmRNAの核外輸送と細胞質における翻訳機構との共役システムの存在が強く示唆された。更に、核内アクチン繊維束の形成には、NESを介してRev-ウイルスRNA複合体にCRM1とRanGTPaseの参加が必要なことが、CRM1の阻害薬であるレプトマイシンB或いはRev-NES変異体を用いた実験から明らかになった。加えてCRM1とRanGTPaseはアクチン繊維束上に共存が確認された事から、Rev/gag RNA複合体の核質内輸送経路の形成のみならづ、同経路上の移動に対し機能的関与が考えられた。

Rev protein は, HIV - 1 ウ イ ル ス mRNA in の RRE に し, with protein の nucleus delivery シ グ ナ ル (NES) を interface し て structure protein (Gag お よ び Env) mRNA の nucleus delivery を う. I 々 々 蛍 れ れ to に 蛍 light in situ Hybridization and び immune 蛍 light staining を い, cytoplasm に お い て も Rev が structure protein mRNA の turn 訳 に masato and す る possibility, and び こ の turn 訳 adjust に Rev / ウ イ ル ス RNA complex と cytoplasm beta ア ク チ ン と meet の が important で あ る matter を shown し て き た. で そ の process, nuclear に お い て も, beta ア ク チ ン と Rev/gagRNA complex の coexistence が 観 examine さ れ, ウ イ ル ス RNA の nucleus delivery に お け る beta ア ク チ ン の masato and が in stopping さ れ た. そ こ で, nuclear に お け る gagRNA and び Rev の is others type を detailed に beg し 検 た results, struck は complex と し て linear structure を と る こ と が shown さ れ, more に こ の linear structure consistent に し て beta ア ク チ ン の is が Ming ら か と な っ た. こ の ア ク チ ン 繊 d の beam forming complex の は, Rev/gag RNA forming に dependent し て お り, Rev - NES - variant を with い た occasions は incomplete で あ っ た. Fun あ に る, こ の ア ク チ ン 繊 d beam は nuclear membrane を super え cytoplasm ア ク チ ン 繊 d と contact す る like が 観 examine さ れ and Cytochalasin に よ る ア ク チ ン の overlap に off よ り gagRNA の nucleus delivery が stop さ れ た こ と か ら, with 繊 d を dielectric し た ウ イ ル ス mRNA の nucleus delivery と cytoplasm に お け る There is a が strong く incitement された of the 訳 organization と <s:1> co-conspiring システム <e:1>. More に, nuclear ア ク チ ン 繊 d の beam forming に は, NES を interface し て Rev - ウ イ ル ス RNA complex に CRM1 と RanGTPase の attend が necessary な こ と が, CRM1 の resistance against 薬 で あ る レ プ ト マ イ シ ン B or い は Rev - NES - variant を with い た be 験 か ら Ming ら か に な っ た. Add え て CRM1 と RanGTPase は ア ク チ ン 繊 d gird に coexistence が confirm さ れ た matter か ら, Rev/gag RNA complex の の form within the nuclear mass transportation 経 road の み な ら づ, with 経 road の mobile に し function of seaborne masato and が exam え ら れ た.

项目成果

T.Kimura: "Nucleocytoplasmic transport of gag mRNA,requires Rev's nuclear export signal-dependent formation of nuclear actin pathway in which Ran-GTPase is colocalized" Cold Spring Harbor Laboratory Workshop on eukaryotic mRNA Processing, Abstracts. 86 (1

T.Kimura：“gag mRNA 的核细胞质运输，需要 Rev 的核输出信号依赖性核肌动蛋白通路的形成，其中 Ran-GTPase 共定位”冷泉港实验室真核 mRNA 加工研讨会，摘要。

I.Hashimoto: "Rev protein of human immunodeficiency virus type 1 facilitates translation of rev-dependent viral messenger RNAs" Acta Histochemica et Cytochemica. 5/6. 615-619 (1997)

I.Hashimoto：“1 型人类免疫缺陷病毒的 Rev 蛋白促进 rev 依赖性病毒信使 RNA 的翻译”Acta Histochemica et Cytochemica。

木村富紀: "「研究室実験マニュアル」 河本圭司編 分担執筆 第12章共焦点走査型レーザー顕微鏡の原理と使い方の実際" 金芳堂(印刷中), (1998)

木村富树：《实验室实验手册》，川本敬二主编，合着，第 12 章：共焦扫描激光显微镜的原理和实际使用，Kinhodo（印刷中），（1998 年）