アクチン線維束に介したHIV-1 RevによるウイルスmRNAの核外輸送

HIV-1 Rev 通过肌动蛋白束将病毒 mRNA 输出到核

• 批准号: 11161232
• 负责人: 木村 富紀
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11161232/
• 关键词: HIV-1 Rev; アクチン線維束; RNA核外輸送; RRE mRNA; luciferase mRNA; 能動輸送; CRM1

1.HIV-1 gag mRNAとRev、CRM1、Ran-GTPaseは核内F-アクチン上で核外輸送シグナル依存性に共存することを確認した。2.G-アクチンに特異的に結合し、F-アクチンを脱重合するLatrunculinB(LAT-B)を作用させたところ、上記細胞因子の共存は消失しgag mRNAの核外輸送は阻害された。3.この輸送阻害効果は可逆的であり、LAT-B除去後遺伝子導入細胞はgag mRNA輸送を再開した。そこで、この細胞を4℃に置いたところ、37℃に置いた場合とは異なり、RNA輸送の再度の阻害が認められた。以上の結果から、RRE RNA-Rev複合体の輸送は温度感受性であると結論した。4.GST-Revに核抽出液を加え共沈するCRM1を指標にRev-CRM1複合体形成の温度感受性を検討したところ、両者の結合は4℃では観察されなかった。また、この温度依存性の結合がGTPgSの添加により濃度依存的に抑制されるのが観察された。5.イントロンレスのluciferase mRNAの核外輸送は、RRE mRNAの輸送と同様温度感受性であると共に、CRM1とGTP結合型RanGTPaseを必要とし、LAT-Bにより阻害されることが観察された(Kimura et al.in preparation)。これまでmRNAの核外輸送は、単純拡散によりエネルギー非依存性に核外輸送されると考えられてきたが、以上の結果はイントロンを含むRev依存性のRRE RNAならびにイントロンレスのluc mRNAは、拡散によらず、核内F-アクチンを介し能動的に輸送されることを強く示唆した。

1. HIV-1 gag mRNA Rev, CRM1 and Ran-GTase are identified as co-dependent on nuclear transport. 2. The effect of Latrunculin B (LAT-B) on G-protein specific binding and F-protein de-binding was observed. The above cytokine blue-shift disappeared and the extracellular transport of gag mRNA was blocked. 3. The transfer inhibition effect is reversible, LAT-B is removed, and the gag mRNA transfer is reopened. When the cells are placed at 4℃, they are placed at 37℃, and RNA transport is blocked again. These results suggest that RRE RNA-Rev complexes are sensitive to temperature. 4.GST-Rev nuclear extract co-precipitation CRM1 index Rev-CRM1 complex formation temperature sensitivity of the study, the combination of 4℃The temperature dependence of GTPgS was observed in combination with concentration dependence. 5. Extranuclear transport of RRE mRNA, RRE mRNA transport and temperature sensitivity, CRM1 and GTP-binding RGTase are necessary, LAT-B are inhibited (Kimura et al.in preparation). These results indicate that the expression of mRNA in the nucleus is independent of the expression of mRNA in the nucleus. The expression of mRNA in the nucleus is independent of the expression of mRNA in the nucleus.

项目成果

Kimura,T.et al.: "Rev-dependent association of the inrton-containing HIV-1 gag mRNA with the nuclear actin bundles and the inhibition of its nucleocytoplasmic transport by latrunculin-B"Genes Cells. (in press). (2000)

Kimura,T.等人：“含有inrton的HIV-1 gag mRNA与核肌动蛋白束的Rev依赖性关联以及latrunculin-B对其核质转运的抑制”Genes Cells。

木村富紀: "「初心者のための研究室実験マニュアル」 河本圭司編 分担執筆 13.共焦点走査型レーザー顕微鏡の原理と使い方の実際"金芳堂. 243 (2000)

Tomiki Kimura：“初学者实验室实验手册”，作者：Keiji Kawamoto，合著者 13. 共焦扫描激光显微镜的原理和实际使用，Konpodo 243 (2000)。