HIV-1 Rev蛋白によるウイルスmRNAの核外輸送調節

HIV-1 Rev 蛋白对病毒 mRNA 核输出的调节

• 批准号: 10180233
• 负责人: 木村 富紀
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10180233/
• 关键词: HIV-1 Rev; 核外輸送シグナル; RRE RNA; アクチン線維束; CRM1; Ran; RNA核外輸送

HIV-1 Rev蛋白の核外輸送シグナル(NES)に対応する細胞固有のRNA輸送機構の解析のため、Fluorescence in situ hybridizationに免疫蛍光染色を組み合わせ、RRE RNAとRev或いはRNA輸送に関わる細胞因子が同一細胞において観察可能な実験系を構築した。木実験系の解析から、Rcγ-RRERNA複合体形成に依存して同複合体は核内外を交通する、Phalloidinにより標識され、免疫電子顕微鏡により確認できたアクチン線維束との共存が明らかになった。このFアクチンを、異なる作用機作を有するCytochalasin B及びLatrunculin Bを用いて別々に脱重合するとgag RNAの細胞質輸送は同様に阻害されたことから、アクチン線維束はRev依存性のRNA核外輸送に対し機能的に関与している事が示唆された。次いでNES結合性輸送因子がアクチンを介した輸送へどのように関与するかを知る目的で、gag RNAとNESレセプターのCRM1或いはRanを二重標識した。CRM1阻害薬及びRevNES変異体を用いた実験から、アクチン線維束を介した核外輸送が成立するにはRNA-Rev複合体中のNESをCRM1がまず認識し、その後CRM1-NES部分にRanが結合することが必要であることが明らかになった。以上の結果は、Rev NESに対応し作用するアクチン線維束を介したウイルスmRNA核外輸送機構の存在を示唆し、Revは転写の場である核から翻訳の場のポリゾームへこの機構を介してRRE RNAを選択的に輸送することで、HIV-1構造遺伝子mRNAの翻訳を間接的に調節すると考えられた。

Rev の nuclear protein HIV - 1 sending シ グ ナ ル (NES) に 応 seaborne す る inherent の cell RNA transportation agency の parsing の た め, Fluorescence in situ hybridization に 蛍 light dye を group み close わ せ, RRE RNA と Rev or い は RNA conveying に masato わ る cytokines が same cells に お い て 観 examine possible な be 験 department を build し た. Wood be 験 is の parsing か ら, Rc gamma RRERNA complex formation に dependent し て with complex は nuclear を inside and outside traffic す る, Phalloidin に よ り logo さ れ, immune electron 顕 micromirror に よ り confirm で き た ア ク チ ン line d beam と の coexistence が Ming ら か に な っ た. こ の F ア ク チ ン を, different な る を function machine for す る Cytochalasin B and び Latrunculin を B with い て don't 々 に overlap す off る と gag RNA の cytoplasm conveying は with others に resistance against さ れ た こ と か ら, ア ク チ ン line d beam は Rev dependency の RNA nucleus delivery に し function of seaborne に masato and し て い が る things in business さ れ た. Time い で NES sexual transmission factor が ア ク チ ン を interface し た conveying へ ど の よ う に masato and す る か を で る purpose, gag RNA と NES レ セ プ タ ー の CRM1 or い は Ran を double identity し た. CRM1 and resistance against 薬 び RevNES - variant を with い た be 験 か ら, ア ク チ ン line d beam を interface し た conveying が set up outside the core す る に は RNA - Rev complex の NES を CRM1 が ま ず し, そ の CRM1 - NES part に Ran が combining す る こ と が necessary で あ る こ と が Ming ら か に な っ た. Above の results は, Rev NES に 応 seaborne し role す る ア ク チ ン line d beam を interface し た ウ イ ル ス mRNA transport agency の exist outside the core を business し, Rev は planning write の field で あ る nuclear か ら turn 訳 の field の ポ リ ゾ ー ム へ こ の institutions を interface し て RRE RNA を sentaku に conveying す る こ と で, HIV - 1 structure but 伝 mRNA の turn 訳 を indirect に adjust す る と exam え ら れ た.

项目成果

木村富紀: "HIV RNAの核外輸送機構" 最新医学. 53・9. 23-28 (1998)

木村富典：“HIV RNA核输出机制”现代医学53・9（1998）。

木村富紀: "「研究室実験マニュアル」 河本圭司編 分担執筆 第12章共焦点走査型レーザー顕微鏡の原理と使い方の実際" 金芳堂(印刷中), (1999)

Tomiki Kimura：《实验室实验手册》，川本敬二主编，合着，第 12 章：共焦扫描激光显微镜的原理和实际使用，Kinhodo（印刷中），（1999 年）