植物病原糸状菌におけるトランスポゾンを用いた遺伝子ギングシステ開発

在植物病原真菌中使用转座子开发遗传系统

• 批准号: 10876009
• 负责人: 柘植 尚志
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10876009/
• 关键词: 植物病原糸状菌; Fusarium oxysporum; トランスポゾン; トランスポゾンタギング

先に申請者らは、ユウガオつる割病菌(Fusarium oxysporumf.sp.lagenariae)から、これまで病原糸状菌では全く報告されていなかったAcタイプトランスポゾン(Tfo1と命名)を単離した。本研究では、Tfo1を用いた糸状菌の遺伝子タギング法の確立を目指し、以下の研究を行った。1. Tfo1の転写RNAと転移中間体の検出Tfolにはトランスポゼース様タンパク質の読み枠(ORF1)が存在する。ユウガオつる割病菌から、ノーザンハイブリダイゼーションとRT-PCRを用いてORF1の転写RNAを検出し、ORF1がトランスポゼース遺伝子として機能していることを示唆した。さらに、PCRを用いて、ユウガオつる割病菌の全DNAから転移中間体と考えられている環状Tfo1を検出した。また、ゲノム中に存在するTfo1の両側には、トランスポゾン挿入領域に特徴的な重複配列が存在することを確認した。以上の結果は、Tfo1が転移活性を有することを強く示唆した。2. 形質転換系を用いたTfo1の転移活性の検出β-グルクロニダーゼ(GUS)遺伝子(uidA)をレポーターとして用いて、Tfo1の転移活性の検出を試みた。全長Tfo1配列をAspergillus nidulansのgpd遺伝子プロモーター(Pgpd)とuidAの間に組み込み、Pgpd::Tfo1::uidA融合ベクターを作製した。本ベクターによる形質転換体では、Tfo1が転移した場合にのみ、GUS活性が検出されると予想された。Pgpd::Tfo1::uidAによる形質転換体の菌体抽出液のGUS活性を測定したところ、Pgpd::uidAによる形質転換体の1/1000程度の活性が検出され、その頻度は低いが、ベクターからのTfo1の切り出しと転移が起きていることが示唆された。そこで現在、この形質転換体を用いて、遺伝子タギングを試みている。

The first applicant shall report the pathogen (Fusarium oxysporum f. sp. lagenaria) to the applicant and the pathogen shall report the pathogen to the applicant. This study is aimed at establishing a method for the identification and identification of Tfo1 gene in the middle of the genome. 1. Tfo1's written RNA and migration intermediates are detected in Tfo1's DNA. The virus is detected by RT-PCR and the ORF1 gene is detected by RT-PCR. PCR is used to detect the whole DNA of the pathogen. To confirm the existence of duplication of Tfo1 in the field The above results show that Tfo1 has a high activity. 2. Detection of the migration activity of Tfo1 in a morphological transformation system using β-glucuronidase (GUS) gene The full-length Tfo1 sequence is Aspergillus nidulans 'gpd sequence.(Pgpd)::uidA fusion sequence. In this paper, the change of the physical and chemical properties of TfO1 was studied. The GUS activity of cell extracts of Pgpd:: Tfo1:: uidA was measured at 1/1000 of the activity of Pgpd::uidA. In addition, the current situation, the quality of the product, the quality of the product, and the quality of the product are also discussed.

项目成果

Okuda,M.: "Tfol:an Ac-like transposon of the plant pathogenic fungus Fusarium oxysporum" Molecular & General Genetics. 258(6). 599-607 (1998)

Okuda，M.：“Tfol：植物病原真菌尖孢镰刀菌的 Ac 样转座子”分子

Tsuge,T.: "Diversity and Use of Agricultural Microorganisms" K.Kato et al.,eds.,Research Council Secretariat of MAFF and National Institute of Agrobiological Resources(印刷中), (1999)

Tsuge, T.：“农业微生物的多样性和利用”K. Kato 等人编辑，MAFF 和国家农业生物资源研究所研究委员会秘书处（出版中），（1999 年）

Tsuge,T: "Molecular Genetics of Host-Specific Toxins in Plant Disease" Kohmoto K.and Yoder,O.C.eds.,Kluwer Academic Publishers, 413 (1998)

Tsuge,T：“植物病害宿主特异性毒素的分子遗传学”Kohmoto K. 和 Yoder,O.C.eds.，Kluwer 学术出版社，413 (1998)