肺線維症進展過程における細胞形質変化機序の遺伝子レベルでの解明―α平滑筋アクチンプロモータトランスジェニックマウスを用いた検討―

从基因水平阐明肺纤维化进展过程中的细胞转化机制 - 使用α-平滑肌肌动蛋白启动子转基因小鼠的研究 -

• 批准号: 10877098
• 负责人: 守山 敏樹
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University (1999)Hyogo Medical University (1998)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877098/
• 关键词: CArG; ゲルシフトアッセイ; one hybrid system; SRF; 転写因子; intron; 肺線維症; α-平滑筋アクチン; heat shock protein 47

昨年度に我々は、ヒトSMαA遺伝子5'上流-891bpおよびintron 1すべてを含む系統(891int-CAT)に加え5'上流-1231bpおよびintron 1を含むもの(123int-CAT)、また891int-CATからintron 1中の約3.3kb(891intΔBH-CAT)、および137bp(891intΔ0-CAT)を欠失させた合計4系統のトランスジェニックマウスを製作した。これらのマウスにおけるCAT発現を解析したところ平滑筋特異的発現および腎糸球体病変におけるSMαA遺伝子発現には intron1の配列、特にCArG#0 motif 周辺の配列が必須であることが明らかになった。この結果をふまえて、このうち891int-CAT および891intΔ0-CATに対してブレオマイシン投与を行い線維化病変を作製したところ、前者のみにSMαA発現部位に一致してCAT発現を認めた。この結果は腎糸球体病変でのSMαA発現に必須であることが明らかとなったCArG#0 motif 周辺の配列が肺線維化病変でのSMαAの発現にも必須の役割を果たすことを示している。今年度は同部位に結合する転写調節因子を同定するためにCArG#0 motif 周辺をプローブとしてゲルシフトアッセイを行った。その結果、2本のシフトバンドを認めそのうちの1本はc-fos遺伝子のSREであるCArG配列で競合阻害を受けること、そして杭SRF抗体添加によりスーパーシフトすることから、このバンドがSRF-CArG複合体であることが明らかとなった。現在、もう1本のバンドを形成するDNA結合蛋白質を同定する目的で酵母one hybrid systemによるcDNAクローニングを進めている。今のところ5種類のDNA結合蛋白質のcDNAクローンが得られている。現在これらの遺伝子産物の線維化病変における発現変化の解析を進めるとともに、培養細胞を用いて発現レベルを強制的に変化をさせた際の細胞形質変化の検討を開始している。以上から、肺線維化病変の分子病態が明らかとなり、さらに新たな治療戦略への道が開けることが期待される。

Last year's に我々は, ヒトSMαA 伝子 5' upstream - 891bp およびintron 1 すべてを INTRODUCTION SYSTEM (891int-CAT) に加え5' upstream - 1231bp およびintron 1を include むもの(123int-CAT)、また891int-CATからintron Approximately 3.3kb in 1 (891intΔBH-CAT), 137bp (891intΔ0-CAT), and a total of 4 system のトランスジェニックマウスをproduced by させた.これらのマウスにおけるCAT発appearをanalyticsしたところSmooth tendon-specific 発appearおよびrenal globus disease変におけるSMαA 缝子発appearにはintron1's arrangement, special にCArG#0 motif zhou躺's arrangement is required.このRESULTSをふまえて、このうち891int-CATおよび891intΔ0-CATに対してブレオマイシンinvestment and を行い线dimensional disease 変したところしたところ, the former のみにSMα発appears the part is consistent してCAT発appears をcognizeめた.このRESULTSはKidney globus disease変でのSMαA発 appearに必であることが明らかとなったCArG#0 motif Zhou Bo's arrangement of lung line dimensional disease 変でのSMαAの発成にもmust be cut off by the fruit たすことをshows している. This year's は Same part of the combination of する転write adjustment factor を同定するためにCArG#0 motif zhou辺をプローブとしてゲルシフトアッセイを行った.そのRESULTS, 2本のシフトバンドをcognitionめそのうちの1本はc-fos缝子のSREであるCArG arrangement でJointing hindrance をReceived けること, SRF Antibody AddedのバンドがSRF-CArG complex であることが明らかとなった. Now, we have formed a DNA-binding protein yeast one hybrid system, a DNA-binding protein yeast, and a cDNA-binding protein yeast. Today's 5 types of DNA-binding protein cDNA クローンが得られている. Nowadays, the analysis of the current dimensional change of the product of the line dimensional disease 変における発 is carried out, and the culture cells are Cell を use いて発appears レベルをforced に変化をさせた间のcell morphology change の検曰をstart している. Above, pulmonary fibrosis, molecular pathology, pulmonary fibrosis, molecular pathology, and new treatments, treatment strategy, road opening, and anticipation.