流れ負荷時の培養内皮細胞内αーアクチニンの実時間挙動解析

流加载过程中培养内皮细胞中α-辅肌动蛋白的实时行为分析

• 批准号: 10877105
• 负责人: 佐藤 正明
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877105/
• 关键词: 内皮細胞; アクチンフィラメント; せん断応力; GFP; αーアクチニン; 力学的刺激; α-アクチニン

1.細胞の剥離過程におけるアクチンフィラメントの挙動の実時間観察前年度の途中から採用しているGFP/アクチンベクターを利用して内皮細胞内に遺伝子を発現させ,アクチンを生細胞において観察することができた.これを利用し,内皮細胞をガラス上で培養しトリプシンによって剥離する際のアクチンフィラメントの実時間の挙動を直接観察しビデオに録画することができた.この結果,アクチンフィラメントは3要素線形粘弾性モデルに従い収縮していた.さらに,主として一方向に収縮が起こり,その直角方向には収縮が起こらない興味ある現象を確認した.2.α-アクチニンの型による細胞内分布の違いα-アクチニン非筋1型と平滑筋型は主にアクチンフィラメントを架橋する部分に発現し,非筋2型はアクチンフィラメント末端と基質との接着部に主として発現することを再確認した.現在,焦点接着キナーゼ(FAK)の活性と併せて検討を進めている.3.流れ負荷実験に伴うアクチンフィラメントの挙動観察1Paのせん断応力を負荷した際のアクチンフィラメントの挙動を実時間で観察することができた.静置培養下においては、アクチンフィラメントも比較的太い束が周辺部に散在していたが,30分後には一部のアクチンフィラメントの太い束が中央部にも観察され,60分後にはこの太い束は消失し,細胞全体にアクチンフィラメントが分散していた.続いて,120分経過後には細胞は伸長しており,アクチンフィラメントは長軸に沿って配向している状態が観察された。

1. During the cell exfoliation process, GFP/GFP was used to detect the expression of genes in endothelial cells. The use of endothelial cells in culture, isolation, and direct observation of the activity of endothelial cells in culture. As a result, the three elements of linear viscosity are reduced. 2. Intracellular distribution of α-amyloid in α-amyloid type 1 and smooth amyloid type 2 was found in the bridging part of α-amyloid type 1 and smooth amyloid type 2. Now, the focus is on the activity of FAK and the movement of FAK. 3. The flow of FAK is controlled by the load. 1Pa of FAK is controlled by the load. 3. The flow of FAK is controlled by the load. Under static culture, the cells were scattered in the peripheral part, 30 minutes later, a part of the cells disappeared in the central part, 60 minutes later, and the whole cells were scattered. After 120 minutes of rotation, the cell elongation was observed along the long axis.

项目成果

Sato M.: "Mechanical stress and actin filament dynamics in cultured endothelial cell"Proc. 4th Int. Symp. on Tissue Eng. for Therapeutic Use. (印刷中).

Sato M.：“培养内皮细胞中的机械应力和肌动蛋白丝动力学”Proc。第四届国际组织工程应用（正在出版）。

Sato M.: "Local mechanical properties measured by atomic force microscopy for cultured bovine endothelial cells exposed to shear stress"J. Biomechanics. 33,1. 127-135 (2000)

Sato M.：“通过原子力显微镜测量暴露于剪切应力的培养牛内皮细胞的局部机械性能”J。

片岡則之: "力学的刺激と内皮細胞骨格構造の変化" 日本バイオレオロジー学会誌. 12-4. 234-246 (1998)

Noriyuki Kataoka：“内皮细胞骨架结构的机械刺激和变化”日本生物流变学会杂志 12-4（1998）。

片岡則之: "せん断応力負荷の初期過程における培養内皮細胞の形態およびF-アクチンフィラメントの変化" 日本機械学会論文集(B編). 64-622. 1801-1808 (1998)

Noriyuki Kataoka：“剪切应力加载初始过程中培养的内皮细胞的形态和 F-肌动蛋白丝的变化”日本机械工程师学会汇刊（编辑 B）1801-1808（1998 年）。

Kataoka,N.: "The morphological responses of cultured bovine aortic endothelial cells to fluid-imposed shear stress under sparse and colony conditions" JSME International Journal Series C. 41-1. 76-82 (1998)

Kataoka,N.：“稀疏和集落条件下培养的牛主动脉内皮细胞对流体施加的剪切应力的形态反应”JSME 国际期刊系列 C. 41-1。