G-CSFリセプター遺伝子導入による癌細胞浸潤能増強の検討

通过导入G-CSF受体基因来增强癌细胞侵袭能力的研究

• 批准号: 11139225
• 负责人: 藤枝 重治
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: 福井医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11139225/
• 关键词: G-CSF; G-CSFリセプター; 浸潤; 頭頚部癌; メタロブロテアーゼ; 遺伝子導入; ザイモグラフィー

われわれは、頭頚部扁平上皮癌細胞株において、Granulocyte Colony-Stimulating Factor(G-CSF、顆粒球刺激因子)が、癌細胞の浸潤能を亢進する作用をもつことを見いだした。その作用機序はG-CSFリセプター(G-CSFR)を持つ癌細胞にリコンビナントG-CSF(rG-CSF)で刺激すると、G-CSFRを介して(G-CSFRのJAK1リン酸化を起こし)IV型コラゲナーゼ活性が亢進するためであることを証明した。以上のことを基盤に本研究では、頭頚部扁平上皮癌細胞株におけるG-CSFRを介したG-CSFの刺激が増殖よりも浸潤に関与し、癌細胞の進展に結びついていることをin vitroの系で最終確認した。(1) G-CSFR遺伝子の遺伝子導入:G-CSFRのcDNAから発現ベクターを作成した。G-CSFR陰性のT3M-1細胞(頭頚部扁平上皮癌細胞株)にG-CSFR発現ベクターを形質導入し、永続発現可能なクローンの選択に成功した。RT-PCR、ウエスタンブロット、免疫染色でG-CSFRの発現を確認した。同様に発現ベクターのみ形質導入したコントロール遺伝子導入細胞株を作成した。(2) G-CSFR遺伝子導入細胞株の浸潤能測定をrG-CSF刺激、非刺激下で測定した。その結果、遺伝子導入細胞株の浸潤能はrG-CSF刺激にて上昇した。コントロール遺伝子導入細胞株では不変であった。(3) G-CSFR遺伝子導入細胞株のIV型コラーゲン活性をゼラチンザイモグラフィーにて判定したところ、rG-CSF刺激にて有意に上昇した。コントロール遺伝子導入細胞株では不変であった。(4) G-CSFリセプター遺伝子導入細胞株の増殖能を測定したところ、rG-CSF刺激にて変化はなかった。以上より、頭頚部扁平上皮癌細胞株の癌浸潤にG-CSFRが関与していることが明らかとなった。

The role of Granulocyte Colony-Stimulating Factor(G-CSF, granulocyte stimulating factor) in the enhancement of cancer cell infiltration in squamous cell carcinoma cell lines of the head and neck is also discussed. The mechanism of action of G-CSF receptor (G-CSFR) on cancer cells was demonstrated by the stimulation of G-CSF(rG-CSF) and G-CSFR mediated by the activation of JAK1 receptor in G-CSFR. Based on the above findings, this study finally confirms that G-CSFR is involved in the proliferation and infiltration of G-CSF in squamous cell carcinoma cell lines of the head and neck, and that this is a critical factor in the progression of cancer cells. (1)Introduction of G-CSFR cDNA: cDNA development of G-CSFR G-CSFR expression in T3M-1 cells (squamous cell carcinoma cell line) was successfully transformed into G-CSFR-negative cells, and G-CSFR expression in T3M-1 cells was successfully transformed into G-CSFR-negative cells. The detection of G-CSFR was confirmed by RT-PCR, immunostaining and PCR. In the same way, the cell line into which the gene was introduced was created. (2)Infiltration ability of G-CSFR gene introduced cell lines was measured under rG-CSF stimulation and non-stimulation. As a result, the infiltration of transfected cell lines increased in response to rG-CSF stimulation. The cell line introduced by the gene was not changed. (3)G-CSF gene introduced into type IV cell lines was determined to be intentionally elevated by rG-CSF stimulation. The cell line introduced by the gene was not changed. (4)The proliferation ability of G-CSF-induced cell lines was measured by PCR and rG-CSF-induced cell culture. G-CSFR is related to the invasion of squamous cell carcinoma of the head and neck.