G-CSFリセプターにおける癌浸潤能責任部位同定と頭頚部癌の同部位遺伝子解析

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癌細胞の組織浸潤には多くの因子が関与しているが、その一つとしてGranulocyte Colony-Stimulating Factor(G-CSF)が挙げられ、G-CSF receptor(G-CSFR)を持つ癌細胞の浸潤能を亢進させる。その作用機序は、G-CSFRを介したIV型コラゲナーゼ活性が亢進するためである。本研究では、G-CSFRのG-CSF刺激による癌細胞浸潤の責任部位を細胞内ドメインを標的に検討・同定し、実際の頭頚部扁平上皮癌および癌細胞株における責任部位の解析を行った。まず、頭頚部扁平上皮癌細胞株を代表とした15種類の固形癌細胞株におけるG-CSFRアイソフォームをPCR法にて解析した。その結果、2つのG-CSFRアイソフォームが癌細胞に見つかった。一つは主に好中球で認められる代表的なアイソフォームであり、もう一つは、細胞内ドメインが欠如したアイソフォームであった。この二つは白血病細胞で認められたものと同一であった。実際の頭頚部扁平上皮癌患者からの癌組織を患者同意のもと検索したが、多くは代表的なアイソフォームの検出のみであった。一方、G-CSFR浸潤能の責任部位をG-CSFR細胞内ドメインから同定するために、6つの部位が順次欠損したG-CSFRのcDNAをPCR法にて作成できた。この6つのcDNAを発現ベクターに組み込み、元来G-CSFRを持たない頭頚部扁平上皮癌細胞株T3M-1にstable transfection行い、G418による選択を行っている。今後、作成したG-CSFR部分欠損遺伝子ベクターを細胞株に導入して、G-CSF刺激における、MT-1MMPや活性型MMPをPCR法やザイモグラフィーにて検討し、G-CSFRにおける癌浸潤の責任部位を同定する予定である。その責任部位が決定したなら、さらに患者癌組織を使ってその塩基配列を調べ、一塩基多型や変異を検討していく予定である。