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VIPがヒトB細胞のIgA産生におけるスイッチ因子である直接的証明

直接证明 VIP 是人类 B 细胞 IgA 产生的开关因子

基本信息

批准号：
08771395
负责人：
藤枝重治
金额：
$ 0.7万
依托单位：
福井医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771395/
关键词：
IgA VIP 環状スイッチDNA クラススイッチ α-germ-line transcript TGF-B CD40

项目摘要

ニューロペプタイトの一種であるVasoactive Intestinal Peptide(VIP)が、IgA産生におけるスイッチ因子であるかどうかを以下のように検討した。慢性扁桃炎によって外科的に摘出されたヒト扁桃よりB細胞を分離後、さらにIgD^+B細胞を分離して、各種濃度のVIPと抗CD40抗体で培養した。(1)IgAの測定:10日間の培養後、細胞上清中のIgAは、VIPが10^<-10>M以上になると抗CD40抗体(0.1μg/ml)存在下で有意に上昇した。VIP単独、抗CD40抗体単独刺激では有意なIgA産生は認められなかった。(2)Sterile germ-line transcriptionの誘導:クラススイッチの前に必ず起こるgerm-line transcriptionをreverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR)によって調べてみると、VIP単独、抗CD40抗体単独刺激の両方でα germ-line transcriptionの誘導を認めた。(3)環状DNA分離と環状スイッチDNAの増幅:Nested-PCRを行い、環状スイッチDNA(Sα/Sμ)の増幅を試みた。VIP(10^<-9>M)と抗CD40抗体(0.1μg/ml)刺激後のB細胞からのみ、環状スイッチDNAの増幅が可能であった。得られたPCR産物からクローンを得、その塩基配列を求めた。得られた塩基配列では、他のクラス(IgGやIgE)へのクラススイッチと比較し、環状スイッチDNAの構成に特別な違いはなかった。以上より抗CD40抗体存在下でVIPがヒトB細胞におけるスイッチ因子であることを同定した。

Vasoactive Intestinal Peptide(VIP) is a kind of IgA production. After isolation of B cells from tonsils, IgD^+B cells were isolated and VIP anti-CD40 antibodies were cultured in various concentrations. (1)IgA assay: After 10 days of culture, IgA and VIP in cell supernatant increased intentionally in the <-10>presence of anti-CD40 antibody (0.1μg/ml). VIP and anti-CD40 antibodies stimulate IgA production. (2) The induction of Sterile germ-line transcription: the induction of germ-line transcription by reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR), VIP and anti-CD40 antibodies. (3)Circular DNA isolation and circular DNA amplification:Nested-PCR, circular DNA(Sα/Sμ) amplification VIP(10^<-9>M) and anti-CD40 antibody (0.1μg/ml) stimulated B cells to increase the amplitude of cyclic DNA. The PCR product was obtained from the DNA sequence and the nucleotide sequence was obtained from the DNA sequence. In addition, the structure of the cyclic DNA is different from that of the IgG IgE. In the presence of anti-CD40 antibodies, VIP cells are isolated from B cells.