新規がん抑制遺伝子p73の構造と機能の解析

新型抑癌基因p73的结构与功能分析

• 批准号: 11139273
• 负责人: 中川原 章
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Chiba Cancer Center (Research Institute)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11139273/
• 关键词: p73; p53; 転写活性化; アポトーシス誘導; 遺伝子変異; インプリンティング

p53がん抑制遺伝子のホモログであるp73の構造と機能を解析し、以下の諸点を明らかにした。1.p73COOH-側プロリン、グルタミンに富む領域(382-491)の転写活性化能を調べるため、同部位を含むp73の複数の断片を酵母転写因子GAL4のDNA結合ドメインに連結して酵母に導入し、トリプトファンおよびヒスチジン欠乏培地下でβ-Galactosidaseの誘導が起こるかどうか調べた。その結果、p73(382-491)が弱いながら転写活性化能を有し、P405RとP425Lの変異はともにその機能を消失させることが分かった。同様の結果はCOS細胞を用いた系でも得られた。2.上記の遺伝子変異が見られたp53にはないp73のCOOH-末端領域の機能を知るために、p73αの種々の変異体を作製し、それらの機能を調べた。まず、p21,Mdm2,Baxのプロモーターを持つ各シフェラーゼレポーターを用いたアッセイの結果、p73αのCOOH-末端領域(アミノ酸549-636)を欠失した変異体では、野生型のp73αに比べて顕著な転写活性化能の増強が観察された。次に、p53の標的配列をプローブとして用いたゲルシフトアッセイの結果、p73αのCOOH-末端領域(アミノ酸549-636)を欠失した変異体では、野生型のp73αに比べて顕著なDNA結合能の増強が見られた。さらに、機能的なp53を欠くSaos-2細胞を用いたコロニー形成実験を行った結果、p73αのCOOH-末端領域(アミノ酸549-636)を欠失した変異体では、野生型のp73αに比べて顕著な細胞増殖抑制能の阻害が観察された。これらの結果から、p73αのCOOH-末端領域(アミノ酸549-636)は、p73αの転写活性化能およびDNA結合能を抑制すること、しかしながら、この領域はp73αの細胞増殖抑制能に必須の機能を担っている可能性が示唆された。また、P405RまたはP425Lの変異をもつp73αを同様の系で解析したところ、p73α(P425L)で転写活性化能の抑制とアポトーシス誘導能の低下が見られた。3.p73エクソン3のStyI多型部位を利用してヘテロ接合性アリルをもつ大腸がん6例、胃がん9例、乳がん19例、肺がん11例を選び、p73のimprintingの有無を調べたが、それは全く認められなかった。

The p53 gene suppresses the computer. The p73 machine can be analyzed and the following information is available. 1. P73COOH-I, E-C, E-V, E-H, C-H, C-R, C-H, C-R, C-R, C-H, C-R, C-G, C-G, B-Galactosidase, B-C, B-C, C, B, G, G The results showed that the activation energy of p73 (382-491) was significant, and that of P405R and P425L was significantly higher than that of P405R and P425L. The same results were obtained by using the COS cell line. two。 The last step is to detect the expression of p53 gene, p73 COOH-the terminal field machine can know that all kinds of products, such as p73 α, can be tested, and the machine will be able to detect them. The results showed that the activity of p73 α-COOH-terminal domain (549-636) and wild-type p73 α-terminal domain (549-636) was stronger than that of wild-type one. The results of p73 α-DNA-terminal domain, p73 α-COOH-terminal domain, wild-type COOH and wild-type COOH were stronger than those of wild-type COOH. The expression of p73 α, p73 α and p73 α, respectively. The results showed that p73 α-COOH-terminal domain, p73 α-terminal domain, p73 α- P405R

项目成果

Ikawa, S., Nakagawara, A., et al.: "53 family genes : structural comparison, expression and mutation"Cell Death Differ.. 6. 1154-1161 (1999)

Ikawa, S.、Nakakawara, A. 等：“53 个家族基因：结构比较、表达和突变”Cell Death Differ.. 6. 1154-1161 (1999)

Shishikura, T., Nakagawara, A., et al.: "Mutational analysis of the p73 gene in human breast cancers"Int. J. Cancer. 84. 321-325 (1999)

Shishikura, T.、Nakakawara, A. 等人：“人类乳腺癌中 p73 基因的突变分析”Int。

Ichimiya, S., Nakagawara, A., et al.: "Genetic analysis of p73 localized at chromosome 1p36.3 in primary neuroblastomas"Eur. J. Cancer. (in press).

Ichimiya, S.、Nakakawara, A. 等人：“原发性神经母细胞瘤中位于染色体 1p36.3 的 p73 的遗传分析”Eur。

Ichimiya, S., Nakagawara, A., et al.: "p73 at chromosome 1p36.3 is lost in advanced stage neuroblastoma but its mutation is infrequent"Oncogene. 18. 1061-1066 (1999)

Ichimiya, S.、Nakakawara, A. 等人：“染色体 1p36.3 上的 p73 在晚期神经母细胞瘤中丢失，但其突变并不常见”癌基因。

Ozaki, T., Nakagawara, A., et al.: "Deletion of the COOH-terminal region of p73a enhances both its transactivation function and DNA-binding activity but inhibits induction of apoptosis in mammalian cells"Cancer Res.. 59. 5902-5907 (1999)

Ozaki, T.、Nakakawara, A. 等人：“删除 p73a 的 COOH 末端区域可增强其反式激活功能和 DNA 结合活性，但会抑制哺乳动物细胞凋亡的诱导”Cancer Res.. 59. 5902