SERAを発現する組み換えBCGワクチンの作製及び防御効果の検討

表达SERA的重组卡介苗疫苗的制备及保护效果检测

基本信息

批准号：
11147223
负责人：
山田毅
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11147223/
关键词：
Recombinant BCG malaria vaccine

项目摘要

(研究の目的)マラリアのワクチン抗原として様々な分子が同定され、ワクチン開発がなされている。その抗原の効果を引き出すのにアジュバントが必要であるが、ヒトに応用可能なアジュバントはまだ十分に開発されていない。結核の予防ワクチンBCG菌はヒトに使用できるアジュバントの中で最大の活性をもし安全性も高い。我々は、抗酸菌の分泌蛋白質α抗原をキャリアーとして外来蛋白質をBCGから分泌させるシステムを作製した。このシステムを用いてネズミマラリアの系で赤内型マラリア原虫の感染防御に成功した。このシステムをヒトに応用するため、ヒト型のP.falciparumの防御抗原SERAをBCG菌から大量に発現分泌させることを試みた。(今年度の成果及び考察)1.これまでにP.falciparumの防御抗原SERA(SE47')をコードする合成遺伝子全体とN末端部(SE47'-N),C末端部(SE47'-C)に二分割した断片をそれぞれα抗原遺伝子内に挿入し、組み換えBCGを作製した。それらを培養後、培養上清中の蛋白質にSE47'が分泌されていることを確認した。その結果、培養上清中に、SE47'の存在を確認することができた。2.次ぎに、SE47'の発現が確認された組み換えBCGをマウスに免疫し、抗体産生誘導能について検討した。マウスは6週令のBALB/c,♀を用いた。組み換えBCGをマウスの皮下に3回接種し、最終免疫後10日目に抗血清を採取した。そして抗SE47'抗体価をABC-ELISA法で測定したところ、400倍希釈で抗SE47'抗体の産生が認められた。

（研究目的）各种分子已被确定为疟疾的疫苗抗原，并开发了疫苗。需要佐剂引起抗原的作用，但是可以应用于人类的佐剂尚未得到充分发展。预防结核病疫苗BCG是可以在人类中使用的佐剂中最活跃，最安全的。我们创建了一个系统，其中使用分枝杆菌的分泌蛋白α抗原从BCG中分泌外蛋白作为载体。使用该系统，我们成功地保护了大鼠疟疾系统中的感染免受内鼻疟疾的寄生虫。为了将该系统应用于人类，我们试图从BCG细菌表达和分泌大量的人类型恶性疟原虫保护性抗原血清。（当年的结果和讨论）1。重组BCG是通过插入编码恶性疟原虫保护性抗原血清（SE47'）的整个合成基因来制备的，并将片段分为N-末端（SE47'-N）和C-末端（SE47'-C）（SE47'-C）和α-抗基因。在培养这些培养后，可以证实SE47'在培养物中的蛋白质中分泌。结果，可以在培养物上清液中确认SE47'的存在。 2。接下来，用重组BCG对小鼠进行免疫，该重组已经证实了SE47'的表达，并检查了它们诱导抗体产生的能力。小鼠为6周大的BALB/C，女性。将小鼠用重组BCG皮下接种三倍，并在最终免疫后10天收集抗血清。然后通过ABC-ELISA方法测量抗SE47'抗体滴度，并在400倍稀释的情况下观察到抗Se47'抗体的产生。