αーシヌクレインの凝集・蓄積と神経細胞死

α-突触核蛋白的聚集/积累和神经元细胞死亡

• 批准号: 11157206
• 负责人: 岩坪 威
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11157206/
• 关键词: α-ミヌクレイン; パーキンソン病; Lew小体; Lewy小体型痴呆症

家族性パーキンソン病(PD)の原因遺伝子α-synucleinは孤発性PDやLewy小体型痴呆症(DLB)に出現するLewy小体(LB)や多系統萎縮症(MSA)のグリアに出現するglial cytoplasmic inclusion(GCI)の構成成分であることが明らかになり、神経変性における役割が注目されている。本年度はDLB,MSA脳に蓄積したα-synucleinの生化学的分析、培養細胞系を用いたα-synuclein蛋白の諸性質の検討を行った。DLB,MSA脳のLB,GCI多発部位をホモジェナイズ後、段階的に抽出し、抗α-synuclein抗体でウェスタン解析した。トリス,Triton-X可溶画分では正常脳組織に由来すると思われる全長α-synuclein蛋白が多量に抽出され、対照例と差はみられなかった。SDS,尿素可溶画分にはDLB,MSA特異的にα-synuclein免疫反応を示す蛋白が抽出され、主に全長α-synucleinの形をとっていた。ヒトα-synucleinを培養細胞に発現させると、14kDaの全長蛋白に翻訳され、細胞質中に広く分布すると同時に核内にも局在が見られた。cycloheximide処理、S35ラベルによるpulse-chase解析から半減期は約20時間以上であることが解った。またプロテアソーム阻害剤ALLN処理後も、ユビキチン化α-synucleinの出現は見られず、α-synuclein量にも変化はみられなかった。疾患脳特異的に検出された不溶性α-synucleinはDLBではLewy小体や変性神経突起、MSAではGCIに由来するものと考えられ、特異的な翻訳後修飾やプロセシングの解析が次の課題である。またユビキチン・プロテアソーム系はα-synucleinの主要な細胞内代謝経路ではないと推定された。

The cause of familial dysentery disease (PD) was α-synuclein. Orphan PD small body dementia (DLB) was found in Lewy corpuscles (LB) and multiple systemic wilt disease (MSA). The components of glial cytoplasmic inclusion (GCI) were found to be conspicuous and mythical. This year, DLB,MSA stored the biochemical analysis of α-synuclein, and cultured the cell line with α-synuclein protein. The extraction of anti-α-synuclein antibody and the analysis of anti-α-synuclein antibody were performed at the back of the LB,GCI multi-site of DLB,MSA. The origin of the normal group of Triton-X soluble picture fractionation is that the whole length of α-synuclein protein is extracted in large quantities, and the difference is different as usual. SDS, α-synuclein immunoreactive assay of urea-soluble fractionated DLB,MSA assay showed that the protein was extracted and the whole length of α-synuclein was purified. In the culture of α-synuclein, the whole length protein of 14kDa was detected, and the distribution of total protein in the cell was detected. Cycloheximide management, S35 operating system, pulse-chase analysis for more than 20 hours during the half-cycle period. In the first place, after the treatment of the ALLN, it was found that the amount of α-synuclein and the amount of α-synuclein in the alpha-synuclein. The symptoms of the disease are insoluble α-synuclein, DLB, Lewy corpuscles, sexual protuberances, the origin of MSA, the origin of the GCI, the correction of the disease, and the analysis of the problem. This is due to the fact that there is a major intracellular pathway in alpha-synuclein.

项目成果

Jakes R,Crowther RA,Lee VM-Y,Trojanowski JQ,Iwatsubo T,Goedert M: "Epitope mapping of LB509, a monoclonal antibody directed against human α-synuclein"Neuroscience Letters. 269. 13-16 (1999)

Jakes R、Crowther RA、Lee VM-Y、Trojanowski JQ、Iwatsubo T、Goedert M：“针对人 α-突触核蛋白的单克隆抗体 LB509 的表位作图”《神经科学快报》269. 13-16 (1999)。

Tomita. T., Takikawa, R., Koyama, A., Morohashi, Y., Takasugi, N., Saido, T.C., Maruyama, K., Iwatsubo, T: "C terminus of presenilin is required for overproduction of amyloidogenic Aβ42 through stabilization and endoproteolysis of presenilin"J. Neuroscien

Tomita.，Takikawa，R.，Koyama，A.，Morohashi，Y.，Takasugi，N.，Saido，T.C.，Maruyama，K.，Iwatsubo，T：“早老素的 C 末端是淀粉样蛋白 Aβ42 过量产生所必需的。通过早老素的稳定化和内切蛋白水解”J. Neuroscien

Okochi M,Walter J,Koyama A,Nakajo S,Baba M,Iwatsubo T,Meijer L,Kahle P,Haass C: "Constitutive phosphorylation of the Parkinson's disease associated α-synuclein"J Biol Chem. 275. 390-397 (2000)

Okochi M、Walter J、Koyama A、Nakajo S、Baba M、Iwatsubo T、Meijer L、Kahle P、Haass C：“帕金森病相关 α-突触核蛋白的组成型磷酸化”J Biol Chem. 275. 390-397 (2000) ）

Fukumoto H, Tomita T, Matsunaga H,Ishibashi Y, Saido TC, Iwatsubo T: "Primary cultures of neuronal and non-neuronal rat brain cells secrete similar proportions of amyloid β peptides ending at Aβ40 and Aβ42."Neuroreport. 10. 2965-2969 (1999)

Fukumoto H、Tomita T、Matsunaga H、Ishibashi Y、Saido TC、Iwatsubo T：“神经元和非神经元大鼠脑细胞的原代培养物分泌相似比例的以 Aβ40 和 Aβ42 结尾的 β 淀粉样肽。”Neuroreport 10。2965- 2969 (1999)

Steiner H,Duff K,Capell A,Roming H,Tomita T,Iwatsubo T,Haass C et al.: "Aloss of function mutation of presenilin-2 interferes with amyloid β peptide production and Notch signaling"J.Biol.Chem.. 274. 28669-28673 (1999)

Steiner H、Duff K、Capell A、Roming H、Tomita T、Iwatsubo T、Haass C 等人：“早老素 2 的功能缺失突变会干扰淀粉样蛋白 β 肽的产生和 Notch 信号传导”J.Biol.Chem.. 274.28669-28673 (1999)