脳脊髄液中α-synuclein微量測定による神経変性疾患診断方法開発の試み

尝试开发一种通过测量脑脊液中少量α-突触核蛋白来诊断神经退行性疾病的方法

• 批准号: 12877096
• 负责人: 岩坪 威
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877096/
• 关键词: パーキンソン病; Lewy小体型痴呆症; α-Synuclein; 生化学マーカー; 髄液診断

α-シヌクレインはパーキンソン病、Lewy小体型痴呆症(DLB)、多系統萎縮症(MSA)などで不溶性線維を形成して脳に蓄積するシナプス蛋白である。遺伝学的、病理学的知見から、α-シヌクレインの凝集は神経細胞死に深い関連を有する変化と考えられている。昨年度までに我々はDLBなどのシヌクレイン蓄積症の脳で不溶化したα-シヌクレインは、C末端側に位置するセリン129が高度にリン酸化されていることを蛋白化学的に同定した。アルツハイマー病(AD)脳神経細胞に蓄積するタウ蛋白がやはり高度のリン酸化を受けており、脳脊髄液中のリン酸化タウがADのよい生化学的診断マーカーとなることを考え合わせると、脳脊髄液中のα-シヌクレイン、特にリン酸化α-シヌクレインを定量することはシヌクレイノパチーの診断に有用である可能性がある。我々はα-シヌクレインのセリン129位のリン酸化を特異的に認識するモノクローナル抗体#64を樹立し、これを用いた酵素免疫測定法(ELISA)の作出を試みた。サンドウィッチELISA法の捕捉抗体として、α-シヌクレインのC末端側を認識するモノクローナル抗体#102を使用し、直接HRP標識したリン酸化依存性抗体#64を検出抗体とする系を組み立てた。このELISAは、カゼインキナーゼ2でセリン129をリン酸化したリコンビナントα-シヌクレインをカットオフ値4ng/mlで検出し、非リン酸化α-シヌクレインとは反応しなかった。DLB脳抽出物尿素可溶画分に回収されるリン酸化α-シヌクレインの定量的検出にも本ELISA系は有効であった。脳脊髄液に適用するために、α-シヌクレインのアミノ末端側と結合する高親和性の捕捉抗体を用いることなどにより感度をさらに改善すべく、系を改良中である。

α-amyloid protein accumulation in the formation of insoluble proteins in Alzheimer's disease, Lewy small form dementia (DLB), multiple system atrophy (MSA). Genetic and pathological findings indicate that there is a deep correlation between α-amyloid aggregation and neuronal death. In the past year, DLB has been found to be highly acidic in the presence of alpha-and C-terminal proteins. The accumulation of protein in the brain cells of Alzheimer's disease (AD) is highly dependent on the degree of acidification, and the degree of acidification in spinal fluid is useful for the biochemical diagnosis of AD. We have developed an enzyme immunoassay (ELISA) to detect the presence of a protein at position 129 of the alpha protein. Capture antibody by ELISA, recognition of C-terminal side of α-glucuronidase antibody #102, direct HRP identification, detection of acid-dependent antibody #64 and system setup The ELISA assay was performed on the basis of a sample size of 2 ng/ml and a sample size of 129 ng/ml. DLB extract urea soluble protein analysis and quantitative detection of α-hydroxy-2-methyl-N-methyl-N-methyl High affinity capture antibody for use in the treatment of spinal cord disease, improved sensitivity, and improved system

项目成果

Kahle PJ: "Selective insolubility of α-synuclein in human Lewy body diseases is recapitulated in a transgenic mouse model"Am J Pathol. 159. 2215-2225 (2001)

Kahle PJ：“在转基因小鼠模型中重现了 α-突触核蛋白在人类路易体疾病中的选择性不溶性”Am J Pathol。159. 2215-2225 (2001)

Fujiwara H: "α-synuclein is phosphorylated in synucleinopathy lesions"Nature Cell Biology. 4. 160-164 (2002)

Fujiwara H：“α-突触核蛋白在突触核蛋白病病变中被磷酸化”《自然细胞生物学》4. 160-164 (2002)。

Okochi M,Walter J,Koyama A,Nakajo S,Baba M,Iwatsubo T,Meijer L,Kahle P,Haass C: "Constitutive phosphorylation of the Parkinson's disease associated α-synuclein"J Biol Chem. 275. 390-397 (2000)

Okochi M、Walter J、Koyama A、Nakajo S、Baba M、Iwatsubo T、Meijer L、Kahle P、Haass C：“帕金森病相关 α-突触核蛋白的组成型磷酸化”J Biol Chem. 275. 390-397 (2000) ）

Yamazaki M,Arai Y,Baba M,Iwatsubo T,Mori O,Katayama Y,Oyanagi K: "α-synuclein inclusions in amygdala in the brains of patients with Parkinsonism-Dementia Complex of Guam"J Neuropathol Exp Neurol. 59. 585-591 (2000)

Yamazaki M、Arai Y、Baba M、Iwatsubo T、Mori O、Katayama Y、Oyanagi K：“关岛帕金森病-痴呆症患者大脑中杏仁核中的 α-突触核蛋白内含物”J Neuropathol Exp Neurol 59。 585- 591 (2000)

Piao Y-S: "Co-localization of α-synuclein and phosphorylated tau in neuronal and glial cytoplasmic inclusions on a patient with multiple system atrophy of long duration"Acta Neuropathol. 101. 285-293 (2001)

Piao Y-S：“长期多系统萎缩患者的神经元和胶质细胞质内含物中 α-突触核蛋白和磷酸化 tau 蛋白的共定位”《神经病理学报》101. 285-293 (2001)。