DNA上での蛋白質間相互作用を促進するHMGによるDNA変形の構造解析

HMG 促进 DNA 上蛋白质-蛋白质相互作用的 DNA 变形结构分析

• 批准号: 11160215
• 负责人: 楯 真一
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Japan Advanced Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11160215/
• 关键词: HMG蛋白質; NMR; 安定同位体標識; DNA構造

1.HMG2蛋白質C末端DNA結合ドメイン(B-ドメイン)の精密立体構造解析:NOEと2面角情報に基づく立体構造解析に加えて、磁場配向により誘導された残余双極子効果とバイセルにより誘導された残余双極子効果を取り入れることにより、精密な立体構造を得た。構造解析の結果、HMG2Bドメインを構成する第2、第3ヘリックスの形成する角度がHMG1の対応するドメインと有意に異なり、この違いが両蛋白質のDNAに対する親和性の違いおよび機能上の役割の違いを説明しえるものと示唆された。2.エンハンスソーム形成因子HMG-Iの高次構造解析を目的としたサンプル調製: HMG-Iのもつ3つのDNA結合ドメインのうちN末端の2つのDNA結合ドメインとC末端側2つの結合ドメインは、それぞれ異なるエンハンサーDNA領域に結合する。本年度は、それぞれ2つのDNA結合ドメインを持つHMG-Iフラグメントの大腸菌による大量発現系の構築と、その精製法の確立を行った。いずれのDNA結合フラグメントも1literの最小培地から約10mg程度のサンプルを高純度に得ることができる。3.HMG-I結合配列を含むDNAフラグメントの作成: HMG-IのそれぞれのDNA結合フラグメントは、異なる23bp程度のDNA領域に結合する。これまでに、23bpのエンハンサーDNA領域に相当するPRDII-NRDIの合成を行い、^<15>N標識したHMG-IのC末端側DNA結合フラグメントとの相互作用をNMRにより確認した。

The C-terminal DNA of 1.HMG2 protein is combined with the precise stereoscopic analysis of the B-terminal (B-terminal): the two-sided angle of the NOE is analyzed, and the magnetic field orientation is used to guide the residual doubles. the results show that the residual bilaterals are accurate, and the precision stereo is obtained. After the analysis of the results, the HMG2B analysis results show that the second and third stages of the test result form the angle of the system. The HMG1 monitoring system is used to determine whether it is intended or not to be used. It is possible to use the service cutting machine to verify that the message message is instigated on the operating machine. two。 The purpose of this study is to analyze the formation factor HMG-I in high order. Purpose: HMG-I

项目成果

K. Ogura: "Solution structure of human acidic fibroblast growth factor and interaction with heparin-derived hexasaccharide"J. Bimol. NMR. 13. 11-24 (1999)

K. Ogura：“人酸性成纤维细胞生长因子的溶液结构及其与肝素衍生六糖的相互作用”J。

S. Mine: "Analysis of the relationship between enzyme and its internal motion using nuclear magnetic resonance"J. Mol. Biol.. 286. 1547-1565 (1999)

S. Mine：“利用核磁共振分析酶及其内部运动之间的关系”J。

K. Hiraga: "Mutational analysis of the reactive site loop of Streptomyces metalloproteinases inhibitor, SMPI"J. Biochem. (Tokyo). 125. 202-209 (1999)

K. Hiraga：“链霉菌金属蛋白酶抑制剂 SMPI 反应位点环的突变分析”J。