Klonierung und Sequenzierung des Gens für ß-Poly(L-Malat)-Hydrolase aus Physarum polycephalum

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b-Poly(L-Malat)-Hydrolase (Polymalatase) von Physarum polycephalum spaltet b-Poly(L-Malat) (PMLA). Diesem wird eine essentielle Rolle beim Zustandekommen der Synchronität der DNA-Replikation in Plasmodien zugeschrieben. Das PMLA-abbauende Enzym wurde isoliert und protein-chemisch charakterisiert. Es entsteht aus einem 200 kDa Vorläufer durch proteolytische Aktivierung. Neueste Evidenzien sprechen zudem für eine Adapterfunktion beim Transport des Polymeren sowie für eine durch Phosphorylierung-Dephosphorylierung regulierte Aktivierung. Die cDNA der 97 kDa Hydrolase wurde nahezu vollständig sequenziert sowie größere Bereiche des pmal-Gens. Die Intron-Exon-Struktur für den bekannten Sequenzbereich wurde charakterisiert. Datenbankvergleiche ergeben keine Verwandtschaft mit bekannten Genen. Im bevorstehenden dritten Projektjahr ist beabsichtigt, die Sequenzierungsarbeiten abzuschließen und die Existenz des postulierten Vorläuferproteins zu klären. Für weiterführende Untersuchungen soll Polymalatase bzw. das Vorläuferprotein rekombinant synthetisiert werden. Die biologische(n) Funktion(en) soll(en) mit Hilfe von insbesondere Knock-Out-Mutanten charakterisiert werden.