誘導型NO合成酵素発現の特異的阻害による敗血症性ショックの遺伝子治療

通过特异性抑制诱导型 NO 合酶表达来治疗感染性休克

• 批准号: 11877263
• 负责人: 平田 結喜緒
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877263/
• 关键词: 一酸化窒素(NO); 敗血症性ショック; 誘導型NO合成酵素; 血管平滑筋; サイトカイン; アンチセンスオリゴマー; 遺伝子治療

心血管系で過剰に生成された一酸化窒素(NO)は敗血症性ショックの発症の原因と考えられることから、誘導型NO合成酵素(iNOS)の発現を特異的に阻害する遺伝子治療の可能性を検討した。ヒトiNOS遺伝子のアンチセンスオリゴマー(ASO)および対照としてミスマッチとスクランブルオリゴマーをホスホチオレートで修飾して作製し、培養ラット血管平滑筋細胞(VSMC)ヘリポフェクチン法で遺伝子導入した。炎症性サイトカイン(IL-1,TNF-α)で刺激したVSMCではiNOS遺伝子の発現誘導がみられ、著明なNO生成がみられたが、ASOを導入した細胞ではiNOSのmRNAと蛋白発現ならびにNO生成の抑制が用量依存性(1-10μg)にみられた。しかし低濃度(1-5μg)の対照オリゴマー導入では抑制効果はみられなかったが、高濃度(10μg)では非特異的に抑制(50%)がみられた。濃度と導入時間を検討した結果、ASO(5μg)で12時間の反応時間で約10%の導入効率であった。以上のin vitroの成績を元にin vivoでiNOS遺伝子のASO導入効率を解析中であり、ラット敗血症性ショックモデルを用いてiNOSの特異的発現阻害による血行動態への効果を明らかにする予定である。

To investigate the causes of the development of toxicities in the blood due to the production of nitric oxide (NO) in the cardiovascular system, and to explore the possibility of gene therapy for specific inhibition of the production of inducible NO synthase (iNOS). The iNOS gene was introduced into the vascular smooth muscle cells (VSMC) by the method of gene transfer. Inflammatory cytokines (IL-1,TNF-α) stimulated the induction of iNOS mRNA and protein production in VSMC and the inhibition of NO production in VSMC in dose-dependent manner (1-10μg). Low concentrations (1-5μg) of the corresponding light source inhibit the introduction of light, while high concentrations (10μg) inhibit non-specific light (50%). The concentration of ASO(5μg) was 12 times and the reaction time was about 10% The results of the above in vitro analysis of the ASO introduction efficiency of iNOS gene in vivo analysis of iNOS specific inhibition of the occurrence of iNOS in vivo and the effect of hemodynamics in vivo analysis.

项目成果

Iwasaki H. et. Al: "Endothelin-mediated vascular growth reguines p42/p44 MAP Kinase and p70S6 Kinase in transactivation of EGF receptor"Enaocriuology. 140. 4659-4668 (1999)

岩崎 H. 等。

Mitaka C et.al.: "Improvement of renal dysfunction in dogs with endotoxinia by a nonselective endothelin receptor autogonist"Crit. Care. Med.. 27. 146-153 (1999)

Mitaka C 等人：“通过非选择性内皮素受体自体激动剂改善患有内毒素的狗的肾功能障碍”Crit。