敗血症性ショックに関与するMIF遺伝子の発現調節機構の解明

阐明MIF基因参与感染性休克的表达调控机制

• 批准号: 14770212
• 负责人: 佐々木 貴史
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770212/
• 关键词: MIF; cDNAクローニング; 大腸菌two hybrid法; タンパク質発現

本年度は、昨年度にクローニングしたMIF遺伝子を用い、大腸菌two hybrid法によって相互作用する遺伝子を同定することを目指した。MIF遺伝子を用いてベイトベクターを構築し、DNA配列決定を行い、DNA配列及びタンパク質のフレームがずれていないことを確認した。このベクター及びヒト精巣から作成したcDNAライブラリーを用いて、同時に大腸菌の形質転換を行った。この遺伝子ライブラリーから導入された遺伝子が、MIF遺伝子と相互作用する遺伝子であった場合、薬剤耐性遺伝子が発現する。これらの系を用いてMIF遺伝子と相互作用する遺伝子のスクリーニングを行った。これらのベクターを用いて大腸菌を形質転換し、96の陽性クローンを得た。これらのクローンを培養しDNAを抽出及び遺伝子配列決定をおこなった。詳細に解析を行った結果、7クローンがMIF自身であった。これら7クローンのMIFcDNAの5'末端は同一箇所ではないことから、独立して相互作用する遺伝子としてクローニングされた。これらのことから、大腸菌two hybrid法の結果は信頼性が高いと思われる。また、MIFはホモ3量体を形成することが報告されていることから、MIF同士で相互作用を示唆している本結果は妥当であると考えられる。しかしながら、残りのクローンはフレームの合わない遺伝子や、疑陽性と思われる遺伝子であり、新たな結合因子を同定するにはいたらなかった。

In the current year and last year, the MIF was used, and the two hybrid method was used to determine the interaction between each other. The MIF configuration determines the rows, the allocation of DNA, and the confirmation of the number of rows, the allocation of rows, and the allocation of DNA. The equipment and equipment should be used to make the cDNA filter for consumer use and the same time for the production of bacteriological bacteria. You can learn from the interaction of the MIF child, the child, the patient, the patient, and the patient. You can use the interaction between MIF and sub-systems to make sure that you don't know what to do. Please tell me that you can use a large fungus in the shape of a fungus or 96 percent of your body in a sexual way. Please tell me how to extract the DNA and how to determine the location of the sub-column. Please parse the results of the rows, and 7% of the results of the MIF itself. At the end of the MIFcDNA 5 'end, the interaction is independent and the interaction is the same. The results of two hybrid method showed that there was a high degree of confidence in sex. The results show that the results are correct, and the results show that the results are correct. The results show that the results are correct, and the results show that the results are correct. The results show that the results are correct, and the results show that the results are not correct. In the same way, the new combination factor is the same as that of the combination factor.