权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

In vitro遺伝子ノックアウトによる細胞周期制御分子の機能解析

体外基因敲除细胞周期调控分子的功能分析

基本信息

批准号：
11877042
负责人：
佐谷秀行
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877042/
关键词：
DT40 HCT1 fzr サイクリンA サイクリンB p27 チェックポイント遺伝子破壊細胞周期

项目摘要

ニワトリBリンパ細胞株DT40は、高等真核細胞で唯一ターゲットインテグレーションが高頻度に起こる細胞であり、本細胞を用いることにより特定の遺伝子をin vitroで破壊し、その機能を詳細に解析することが可能である。私達は酵母においてサイクリンA及びサイクリンBの分解に機能する分子である。HCT1(ショウジョウバエのホモログはfizzy-related(fzr)と呼ぶ)遺伝子のトリホモログのノックアウトを行い、高等真核細胞における機能について解析することを本研究計画の目的とした。本年度の成果を要約すると:1)HCT1/fzrのトリホモログのcDNAおよびゲノムDNAのクローニングを行った。2)DT40細胞においてHCT1/fzr遺伝子の破壊を行ったところ、G1期に本来検出できない分裂期サイクリン(サイクリンA、サイクリンB)が高く発現していることが認められた。DT40野生株はG1サイクリンの特異的阻害分子であるp27を発現させるとG1期で停止するのに対し、変異株ではS期に突入することが認められ、分裂期サイクリンの不定期発現(unscheduled expression)は細胞周期の制御異常を来たすことが分かった。更に、このHCT1/fzr遺伝子破壊株にヒトh-fzr遺伝子を強制発現したところG1期においても分裂期サイクリンが検出されなくなり、p27発現によってG1期に停止した。

Cell line DT40 is unique to higher eukaryotes and has a high frequency of gene expression in cells that are used in vitro to analyze specific genes in detail. The molecular function of yeast in the decomposition of protein A and protein B HCT1(HCT 1) is a novel gene that can be used to analyze the function of higher eukaryotes. The results of this year are summarized as follows:1)HCT1/fzr cDNA and DNA translation 2) DT40 cells were found to be highly active in HCT1/fzr gene expression, G1 gene expression and mitotic phase (A, B). DT40 wild strain has a G1-specific inhibitor molecule, p27, and G1-phase arrest, while mutant strain has an S-phase intrusion, unscheduled expression, and abnormal cell cycle control. In addition, the HCT1/fzr gene was found in the G1 phase, and the p27 gene was found in the G1 phase.