ヒト脳腫瘍細胞株を用いたin vitro遺伝子ターゲッティング-遺伝子変異と治療感受性の関連解析-

使用人脑肿瘤细胞系的体外基因打靶-基因突变与治疗敏感性之间的关系分析-

• 批准号: 12877216
• 负责人: 佐谷 秀行
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877216/
• 关键词: 遺伝子破壊; mad2; 分裂期チェックポイント; 脳腫瘍; ドミナントネガティブ; 細胞周期; ノコダゾール; U87MG

ヒト細胞においては、ターゲットインテグレーションが生じる頻度は極めて低く、従来in vitroでの遺伝子破壊は技術的に難しいと考えられてきた。しかし、1998年頃より、ヒト大腸癌培養細胞を用いた遺伝子破壊とその有用性が少数のグループによって報告されており、決して不可能ではないことが証明されている。私達は細胞周期関連遺伝子のヒト脳腫瘍細胞における機能を正確に解析するため、これらを順次破壊することを計画しているが、遂行にあたり様々な技術的問題点が生じることは予想される。今回の萌芽研究ではU87MGヒトグリオーマ細胞(可視的な染色体変化はない細胞。p53遺伝子は正常。p16遺伝子の欠失あり)を用いて、分裂期チェックポイントを制御していると考えられているmad2遺伝子のコンディショナルミュータント(培養途中に特定の遺伝子のON/OFFを制御することができる変異体)を作成し、本遺伝子のヒト細胞における機能の解析ならびに放射線照射、抗がん剤に対する感受性の変化について調べることを目的として研究を行った。現時点でmad2のコンディショナルミュ-タントは完成していないが,ドミナントネガティブにmad2の機能を抑制することのできる発現系が構築できており,このミュータントを定常的に発現する細胞を現在作成中である。本細胞を用いて分裂期チェックポイントに異常をきたした細胞の形質を検討する予定である。

The frequency of cell phone calls is very low, and the frequency of cell phone calls is very low. Since 1998, the usefulness of genetic analysis in the use of cultured colorectal cancer cells has been reported by a few groups, and the determination is impossible. The problem of cell cycle related genes and cell function analysis is that the cell cycle related genes and cell functions are analyzed correctly, and the cell cycle related genes and cell functions are analyzed sequentially. This year's germination research is U87MG, which is a visible chromosome transformation cell. P53 is normal. p16 gene is missing, and it is used in the middle of the division period, and it is used in the control period.(On/OFF control of specific genes during culture), functional analysis of the cells of this gene, radiation irradiation, sensitivity change of resistance to specific genes, and research on the purpose of this study. At this point, the mad2 gene expression is complete, and the mad2 gene expression system is constructed to inhibit the mad 2 gene expression. The cell is divided into two parts: the first part is divided into two parts: the second part is divided into three parts: the third part is divided into three parts: the fourth part is divided into four parts

项目成果

Hanada,N. et al: "NE-dlg, a mammalian homolog of Drosophila dlg tumor suppressor, induces growth suppression and impairment of cell adhesion : Possible involvement of down-regulation of b-catenin by NE-dlg expression."Int J Cancer. 86. 480-488 (2000)

花田，N.

Eto,H. et al: "Mapping and regulation of the tumor-associated epitope recognized by mAb RS-11."J Biol Chem. 275. 27075-27083 (2000)

江藤，H.

Fujita,N. et al: "The mechanism of transcriptional regulation by methyl-CpG binding protein MBD1."Mol Cell Biol. 20. 5107-5118 (2000)

藤田，N.

Tsuiki,H. et al: "Mechanism of hyperploid cell formation induced by microtubule inhibiting drug in glioma cell lines."Oncogene. (印刷中). (2001)

Tsuiki, H. 等人：“神经胶质瘤细胞系中微管抑制药物诱导的超倍体细胞形成的机制”。Oncogene（出版中）。

Hirota,T. et al: "Zyxin, a regulator of actin filament assembly, targets the mitotic apparatus by interacting with h-warts/LATS1 tumor suppressor."J Cell Biol. 149. 1073-1086 (2000)

广田，T.