テロメラーゼ酵素活性を阻害する植物成分検索法確立の可能性

建立抑制端粒酶活性的植物成分寻找方法的可能性

基本信息

批准号：
11877374
负责人：
大塚英昭
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

癌細胞は脱分化を起こし、無限増殖能を獲得した細胞である。この細胞にはテロメア長維持機構、つまり通常は、発現していないテロメラーゼの活性が現れていることが多い。そこで本酵素活性を阻害する物質の探索は細胞の癌化阻害、ひいては固体における癌的病変を寛解する事を期待したい。テロメラーゼ伸張反応は20度、30分間行い、その後90度3分間でテロメラーゼを失活させた。次いで94度45秒、50度45秒、72度60秒のPCR反応を27〜29リサイクル行うことで活性が測定できることが明らかとなった。増幅後は電気泳動でラダーを観察できた。この方法を用いて幾つかの植物エキスについて検討した。最初に心配した共存する可能性のあるRNAaseによるテロメラーゼテンプレートの分解はあまり観測されなかった。植物により明らかに差は認められるが、テロメラーゼ反応を阻害する様に見られるエキスでは、同時に内部標準物質であるITASの発現も阻害した様に感じられた。HIVのRNAをテンプレートとするDNAポリメラーゼの強力な阻害物質が蝸牛から発見されたが、実は食物連鎖でテリハボクの成分であろうとの結論に達している。そこで、沖縄で採集した本植物のエキスを用いて検討したところ、テロメアのラダーが確認されないと同時にITASのバンドも全く確認できなかった。ダイリューションをかけても同様で、多分にPCRに必要なTaqDNAポリメラーゼも阻害しているとの結論に達した。今後は同様な成分の検索をDNAをテンプレートとするTaqDNAポリメラーゼの阻害物質でも、いずれにしてDNAポリメラーゼであるテロメラーゼの阻害活性を担う可能性がある。よってITAS指標として簡便な方法で予備的スクリーニングを行う方が有効であると結論された。

癌细胞是经过去分化并具有无限增殖潜力的细胞。这些细胞通常表现出端粒长度维持机制，即正常未表现的端粒酶的活性。因此，我们希望寻找抑制这种酶活性的物质会抑制细胞癌，从而减轻固体中癌性病变的缓解。在20°C下进行30分钟，然后进行90°C进行3分钟。然后发现可以通过在94°45秒，50°45秒和72°60秒的时间内回收27-29个PCR反应来测量活性。放大后，可以通过电泳观察到梯子。使用这种方法检查了几种植物提取物。未观察到最初令人担忧的潜在共存的RNAase，端粒酶模板的降解是没有观察到的。尽管植物之间存在明显的差异，但似乎抑制端粒酶反应的提取物似乎也抑制了内标的ITA的表达。在耳蜗中发现了一种强大的HIV RNA-TNA聚合酶抑制剂，但得出的结论是，它实际上是食物链中Terrihabok的组成部分。因此，当我们使用在冲绳收集的该植物的提取物进行研究时，我们发现端粒梯子尚未确认，与此同时，我们无法确认任何ITA频带。即使稀释也是如此，我们得出的结论是，它也可能抑制taqDNA聚合酶，这对于PCR是必不可少的。将来，使用DNA作为模板搜索相似成分的TaqDNA聚合酶的抑制剂都可能负责端粒酶的抑制活性，即DNA聚合酶。因此，结论是，作为ITAS指标，初步筛选将以简单的方式更有效。