新たな作用点を持った強心薬スクリーニング法の開発

具有新作用点的强心药物筛选方法的开发

基本信息

  • 批准号:
    11877412
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.38万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 财政年份:
    1999
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1999 至 2000
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

本研究は、心筋小胞体のカルシウム・ポンプ-ホスホランバン系に作用点を持った新たな強心薬開発のためのスクリーニング・システム確立を目指したものである。スクリーニングの原理は、カルシウム・ポンプのホスホランバン結合部位の融合蛋白質及び標識を付けたホスホランバンの部分ペプチドを使用して、両者の結合及び解離を指標とするものである。このようなスクリーニング・システムの確立のため、昨年度は、カルシウム・ポンプとホスホランバンとの結合を再現できるカルシウム・ポンプ融合蛋白質とホスホランバン部分ペプチド融合蛋白質の作成を行い、カラムを用いて両者の結合を再現し定量することに成功した。本年度は、薬剤スクリーニングのための大量サンプル処理法を確立するために、96穴プレートを用いた両融合蛋白質結合定量法の確立と本システム有効性の検討を行った。その結果、カルシウム・ポンプ融合蛋白質を96穴プレートに固相化し、ホスホランバン部分ペプチド融合蛋白質を加え、洗浄の後、ホスホランバン部分ペプチド融合蛋白質の標識に対する抗体で検出することにより、両融合蛋白質の結合量を定量することが出来た。この結合は、ホスホランバン部分ペプチド融合蛋白質のcAMP依存性燐酸化酵素により阻害された。同様の阻害は、cAMPによる燐酸化部位であるSer16をAspに置換した変異体ホスホランバン部分ペプチド融合蛋白質でも認められた。すなわち、本システムにおいてもカルシウム・ポンプとホスホランバンの結合が再現され、両者の結合の性質を保持していることが示された。さらに、今後見出そうとしている薬物と同様の効果を持つと考えられるホスホランバン抗体(mAbA1)の効果を調べたところ、濃度依存性に両蛋白質の結合を著明に阻害した。以上の結果は、本システムが薬剤スクリーニングにも有効であることを示している。
In this study, the mechanism of the interaction between the two systems was studied and the mechanism of the interaction between the two systems was established. The principle of the fusion protein and the identification of the binding site of the fusion protein are used to determine the binding and dissociation of the fusion protein. The establishment and quantification of the fusion protein was successfully carried out in the production and use of fusion protein. This year, we conducted a study to establish the effectiveness of the 96-point fusion protein binding quantitative method for the determination of protein binding. The results showed that the fusion protein was immobilized at 96 sites, partially purified fusion protein was added, washed, partially purified fusion protein was identified, antibody was detected, and the binding amount of fusion protein was quantified. The binding of these proteins to cAMP-dependent phosphorylases is inhibited by the presence of a partial fusion protein. The same resistance, cAMP, phosphorylation site, Ser16, Asp, and heterozygote were identified. The property of the bond is maintained. The effect of mAbA1 on protein binding is regulated by the concentration dependence of mAbA1 on protein binding. The above results show that the system has been modified.

项目成果

期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Inouye,S.: "Distribution and developmental changes of adenylate kinase isozymes in the rat brain."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 254. 618-622 (1999)
Inouye,S.:“大鼠大脑中腺苷酸激酶同工酶的分布和发育变化。”Biochem.Biophys.Res.Commun.. 254. 618-622 (1999)
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Yamada,Y.: "Activation of channel activity of the NMDA receptor-PSD-95 complex by guanylate kinase-associated protein(GKAP)."FEBS Lett.. 458. 295-298 (1999)
Yamada,Y.:“通过鸟苷酸激酶相关蛋白 (GKAP) 激活 NMDA 受体-PSD-95 复合物的通道活性。”FEBS Lett.. 458. 295-298 (1999)
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
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