生体膜蛋白質の細胞膜上の局在化に関与する新規システムの解明

阐明参与生物膜蛋白在细胞膜上定位的新系统

• 批准号: 11878117
• 负责人: 金澤 浩
• 金额: --
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11878117/
• 关键词: 膜蛋白質; イオン輸送; 細胞内輸送; モーター蛋白質; 遺伝子工学

細胞膜に存在するイオン輸送蛋白質や種々の刺激受容蛋白質の機能には、それらの細胞膜上の特定の部位への局在化や、細胞内骨格との相互作用が関与する事が、次第に明らかにされつつある。しかし、局在化を可能とする細胞膜への、あるいは細胞膜上での蛋白質の移動の分子機構については、ほとんど明らかになっていない。本研究では、高等真核生物の膜に存在するNa+/H+交換輸送蛋白質に注目し、本輸送蛋白質の細胞質ドメインに結合する3種の新しい蛋白質遺伝子をクローン化した。この内の一種は、Ca2+を結合し、また、Na+/H+交換輸送たんぱく質に直接結合し既知のカルシニューリンに相同性がある(CHPと呼ぶ)。また、このCHPに結合する蛋白質を検索したところ、既知のキネシンと全く同じ配列と有しさらにそのなかに新規の配列をもつモーター蛋白質の遺伝子(新規キネシン,KIF1α)と、アポトーシス関連蛋白キナーゼドメインと相同な配列を有する新規遺伝子(Cbk,とよぶ)の2種のクローンをえた。これら蛋白質の細胞膜上への局在化への関与を明らかにする目的で,それぞれを大腸菌で大量発現させ精製後ウサギに免役し抗体を作成した。また、それぞれにGFP(green fluorescence protein)との融合蛋白質を作成し細胞に導入した。このようなアプローチから、新規キネシンが脳内で発現が高いこと、CbkとCHPは、細胞核および粗面小胞体領域に存在し、細胞の増殖条件によって核や細胞膜へ一部が移動することが明らかとなった。また、これらの蛋白質を大量に生産、精製し試験管内での機能発現を観察する実験系の基盤造りにも成功している。これらの成果を、日本生化学会や分子生物学会の年会で報告し、論文を投稿中である。

The function of protein transport, protein stimulation and receptivity in cell membrane is related to the interaction of specific sites on cell membrane and intracellular bone structure. The molecular mechanism of protein movement on the cell membrane In this study, three novel proteins were identified for Na+/H+ exchange protein binding in higher eukaryotic membranes. One of these species is Ca2+ binding, Na+/H+ exchange transport, and direct binding. 2 kinds of new protein sequences (Cbk, Cbk) are found in protein sequences (KIF1 α, KIF1 α), KIF2 proteins (Cbk, Cbk) and KIF3 proteins (KIF1 α, KIF1 α). For the purpose of purification and purification of proteins on cell membranes, antibodies are produced in large quantities by Escherichia coli. In addition, a fusion protein of GFP(green fluorescence protein) was prepared and introduced into the cells. The cell growth condition is that the nucleus and the cell membrane are moved. The protein was produced in large quantities, purified, and the functional development of the system was observed successfully. Report of the Annual Meeting of the Society of Molecular Biology and the Society of Biochemistry of Japan

项目成果

H.Inoue 他: "Targeted disruption of the gene encoding the proteolipid subunit of mouse vacuolar H^+ -ATPase leads to early embryonic lethality"Biochimica et Biophysica Acta. 1413. 130-138 (1999)

H. Inoue 等人：“靶向破坏编码小鼠液泡 H^+ -ATP酶蛋白脂质亚基的基因导致早期胚胎致死”Biochimica et Biophysicala Acta. 1413. 130-138 (1999)。

H.Inoue 他: "Expression of functional Na^+/H^+ antiporters of Helicobacter pylori in antiporter-deficient Echerichia coli mutants"FEBS Letters. 443. 11-16 (1999)

H. Inoue 等人：“幽门螺杆菌功能性 Na^+/H^+ 逆向转运蛋白在反向转运蛋白缺陷型大肠杆菌突变体中的表达”，FEBS Letters 443. 11-16 (1999)。

金澤 浩: "たんぱく質分子表面構造と機能の系統的解析"生産と技術. 51. 35-38 (1999)

Hiroshi Kanazawa：“蛋白质分子表面结构和功能的系统分析”生产与技术 51. 35-38 (1999)。

M.Futai,H.Kanazawa,他: "Luminal acidification of diverse organelles by V-ATPase in animal cells"The Journal of Experimental Biology. 203. 107-116 (2000)

M. Futai、H. Kanazawa 等人：“动物细胞中 V-ATP 酶对多种细胞器的管腔酸化”实验生物学杂志 203. 107-116 (2000)。