新しい作用点の微生物由来プロテアソーム阻害剤の探索

寻找具有新作用点的微生物蛋白酶体抑制剂

• 批准号: 11680597
• 负责人: 田畠 典子
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Kitasato Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11680597/
• 关键词: プロテアソーム阻害剤; 微生物代謝産物; プロテアソーム; 阻害剤; PGPH

微生物由来のプロテアソーム阻害剤として土壌分離糸状菌FO-8840株の培養液より12成分の活性物質を単離精製した。4Lの培養液より得られた粗物質2.66gを出発原料にODSゲルカラムクロマトグラフィー、Sephadex LH-20、逆相系分取HPLCで精製し12成分のFO-8840-A(0.29mg),B(0.11mg),C(0.11mg),D(0.10mg),E(0.61mg),F(0.99mg),G(17.8mg),H(0.53mg),I(0.10mg),J(0.04mg),K(0.22mg),L(19.2mg)を単離した。プロテアソームの加水分解活性はウシ赤血球より部分精製した20Sプロテアソームを酵素源とし、蛍光発色団を有する人工基質(キモトリプシン様活性基質)を用い、37℃10分間反応させ切り出されたAMCを96穴蛍光マイクロプレートリーダーで測定し、酵素活性とした。これらのプロテアソーム活性に対するIC_<50>値(μg/ml)はA(0.95),B(0.17),C(0.19),D(<0.05),E(1.1),F(6.2),G(45),H(7.3),I(1.3),J(0.62),K(6.0),L(>50)と測定された。特にD成分は非常に強力な阻害活性を示すことが分かった。現在各種NMRならびに各種機器分析を行ない構造解析中である。

The origin of microorganisms is the culture medium of the bacterial strain FO-8840 isolated from the source of the inhibitory agent and the 12-ingredient active substance is isolated and refined. 4L of culture medium, crude material, 2.66g, raw material, ODS, ゲルカラムクロマトグラフィー, Sephadex LH-20, reverse phase separation of 12 components refined by HPLC, FO-8840-A (0.29mg), B (0.11mg), C (0.11mg), D (0.10mg), E (0.61 mg), F(0.99mg), G(17.8mg), H(0.53mg), I(0.10mg), J(0.04mg), K(0.22mg), L(19.2mg)を単里した.プロテアソームの Hydrolyzed active erythrocyte erythrocyte partially purified 20SプロテアソームをEnzyme source とし, 荍光発色団を有する artificial matrix (キモトリプシン様ACTIVE Matrix)をUsed, 37℃10 minutes reaction させcutり出されたAM Cを96 acupuncture point is used to measure the enzyme activity and enzyme activity.これらのプロテアソームActive に対するIC_<50>夤(μg/ml)はA(0.95),B(0.17),C(0.19),D(<0.05 ),E(1.1),F(6.2),G(45),H(7.3),I(1.3),J(0.62),K(6.0),L(>50)とmeasurementされた. The special ingredient D is very powerful and has a very strong inhibitory effect on activity. Nowadays, various NMR analysis and various machine analysis and structural analysis are in progress.