CHO変異細胞および相補遺伝子を用いたペルオキシソーム形成初期過程の解明

使用 CHO 突变细胞和互补基因阐明过氧化物酶体形成的早期过程

• 批准号: 00J00756
• 负责人: 松園 裕嗣
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J00756/
• 关键词: 細胞小器官; ペルオキシソーム; ペルオキシン; 細胞生物学

Pex19pは299アミノ酸から成るファルネシル化タンパク質で、ペルオキシソーム形成の初期過程すなわちペルオキシソーム膜形成過程に重要な機能を有する因子であると推定されている。これまでに酵母ツーハイブリッド法あるいはGST融合タンパク質を用いたin vitro結合実験において、このPex19pが6種のペルオキシソーム膜タンパク質(Pex3P, Pex10P, Pex11pβ, Pex13p, Pex14p, Pex16p)と相互作用することを明らかにしている。本年度、私はまずペルオキシソーム欠損性変異細胞ZP119に対して野生型あるいは部位欠失型ヒトPEX19を導入し、ペルオキシソームマトリクスタンパク質および膜タンパク質に対する免疫染色によって、ペルオキシソーム形成回復に重要な領域の検討を行った。その結果、Pex19pのアミノ末端部分およびカルボキシル末端部分の双方に、Pex19pによるペルオキシソーム形成に重要な負の電荷に富む領域の存在を明らかにした。また、Pex3PはPex19pと同様にペルオキシソーム膜形成に関与する事が知られているが、Pex19pとPex3pとの相互作用にこの領域が関与することも明らかにした。このことは、Pex19pとPex3pの相互作用がペルオキシソーム膜の生合成機構において非常に重要な機能を有することを示唆するものである。また、Pex19pは細胞内で主に細胞質に散在しているが、その1部はペルオキシソームに局在しており、このことはペルオキシソーム形成における膜タンパク質の輸送機構、あるいは保守管理に重要な意義を持つと考えられる。そこで、野生型の細胞におけるPex19pのペルオキシソームへの局在化に必要な領域の検討を行ったところ、前述の相補活性の検討において活性を持たない様なPex19pの短い領域においても充分に、局在化が可能であることを明らかにした。

Pex19p 299: The initial process of acid formation, the quality of the product, the initial process of film formation, the important function of the film formation process, and the estimation of the quality of the product In this study, six kinds of Pex19p interactions (Pex 3P, Pex 10P, Pex 11p β, Pex 13p, Pex 14p, Pex 16p) were identified. This year, we introduced the mutant ZP119 into the wild-type and the mutant PEX19 into the mutant ZP119. We also studied the important areas of the mutant ZP119 in the immunostaining and the formation of the mutant ZP119 As a result, both sides of the Pex 19p terminal portion and the Pex 19p terminal portion are important for the formation of negative charges and the existence of rich fields. Pex 19p and Pex 19p interact with each other to form a membrane. The interaction between Pex19p and Pex3p is a very important function of membrane synthesis. In addition, Pex19p has a large number of cytoplasmic components scattered in the cytoplasm, which are important for the formation of membrane components and transport mechanisms, and for conservative management. In this case, the wild-type cells were selected from the group consisting of Pex19p, Pex19, Pex19, Pe