ツメガエル卵を用いた新規Wee1キナーゼおよびPrkキナーゼの機能解析

使用非洲爪蟾卵对新型 Wee1 激酶和 Prk 激酶进行功能分析

• 批准号: 00J00762
• 负责人: 岡本 健吾
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J00762/
• 关键词: 細胞周期; アフリカツメガエル; Wee1; Cdc2; MPF

細胞の分裂・増殖は、G1/S/G2/M期からなる細胞周期を通じておこる。なかでもG2期からM期への進行はCdc2/サイクリンB複合体であるM期促進因子(MPF)による制御を受けている。Wee1キナーゼはCdc2のTyr15残基をリン酸化することでMPFの負の制御因子として働いている。脊椎動物にはWee1が二種類存在し、母性型Wee1(Wee1A)と胚性型Wee1(Wee1B)とがある。これらのアイソフォームは互いに分解制御機構・活性制御機構が異なることで、初期発生過程における細胞周期様式の変遷に対応している。一般にWee1はN末端側に長い調節領域(N-terminal regulatory domain ; NRD)を有する。Wee1BのNRD(240a.a.)を段階的に欠失した変異体を作成しそれらのM期進行阻害活性を比較した結果、NRD中央40a.a.の欠失変異体において阻害活性が著しく低下することが分かった。この事より、Wee1BのNRDの中央には活性制御領域が存在することが示唆された。興味深いことに、この領域にはWee1Aや他種のWee1でも高度に保存されている部位が2つ近接して存在していた。そこで、その保存された2つの部位をそれぞれAla置換したWee1B変異体を作成し、阻害活性を比較した。その結果、一方の変異体では阻害活性が上昇したのに対して、もう一方の変異体では阻害活性が著しく低下した。またin vitroの系による解析から、阻害活性が低下した変異体においてはWee1の基質であるMPFとの結合能が低下することが分かった。この事より、この部位が基質認識に重要な役割を担っていることが示唆された。以上の結果より、Wee1のN末端側調節領域には正と負の両方の調節部位が近接して存在することが初めて示された。

Cell division and proliferation, G1/S/G2/M phase and the cell cycle. The Cdc2/サイクリンB complex is used to control the G2 phase and the M phase and is controlled by the M phase promoting factor (MPF). Wee1キナーゼはCdc2のTyr15 residue をリン acidification することでMPFのnegative control factor として働いている. There are two types of vertebrate Wee1: maternal type Wee1 (Wee1A) and embryonic type Wee1 (Wee1B). The decomposition control mechanism and the active control mechanism are different.ることで、Initial growth process におけるcell cycle様styleの変动に対応している. Generally, Wee1 has a long N-terminal regulatory domain (NRD) on the N-terminal side. Wee1B's NRD (240a.a.) has been produced in the first stage of its development and has been blocked in the M stage. Comparing the results, the NRD Central 40a.a. has lost its allogeneic activity and reduced its activity.この事より、Wee1BのNRDの中にはActivity control field がexisting することがshows instigation された. Interesting deep いことに, この domain にはWee1Aやother species のWee1でもhigh にpreserved されているpart が2つclose してexistent していた.そこで、そのPreserved された2つのparts をそれぞれAla replacement したWee1B変variant をmadeし、Block activity をComparison した.そのRESULTS, の変variant body では inhibiting activity が rises したのに対して, もう 1 party の変 variegated body では inhibiting activity が しく した decreases.またin The in vitro system has been analyzed and the inhibitory activity has been reduced, and the inhibitory activity has been reduced. It is important to understand the substrate of the parts of the body and the parts of the body. The results of the above are that the adjustment area on the N terminal side of Wee1 is positive and negative, and the adjustment part is close to the existing one.

项目成果

岡本 健吾: "The existence of two distinct Wee1 isoforms in Xenopus : implications for the developmental regulation of the cell cycle"The EMBO Journal. Vol.21 No.10. 2472-2484 (2002)

Kengo Okamoto：“爪蟾中存在两种不同的 Wee1 亚型：对细胞周期发育调节的影响”EMBO 杂志第 21 卷第 2472-2484 期（2002 年）。