Wee1キナーゼのドメイン解析と相互作用因子の同定

Wee1 激酶的结构域分析和相互作用因素的鉴定

• 批准号: 03J07582
• 负责人: 岡本 健吾
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J07582/
• 关键词: 細胞周期; アフリカツメガエル; Wee1; MPF; Pin1; Cdc2

G2期からM期への進行はCdc2/サイクリンB複合体であるM期促進因子(MPF)による制御を受けている。負の制御因子であるWee1キナーゼはCdc2のY15をリン酸化することでMPF活性を抑制している。ツメガエルWee1のN末端側調節領域には生理活性を正および負に制御する調節モチーフ(それぞれNINモチーフおよびTPモチーフと命名)が近接して存在しており、TPモチーフはMPFによってM期特異的にリン酸化される。本研究では、ツメガエル卵を用いてTPモチーフを介したWee1の不活性化機構の詳細を明らかにした。TPモチーフのアラニン置換体(AP)は、野生型(WT)よりも強くM基進行を阻害したが、WTとAP変異体のG2期におけるCdc2 Y5へのリン酸化能に有意な差は見られなかった。さらにin vitro kinase assayの結果から、MPFによるTPモチーフのリン酸化のみではWee1活性が低下しないことが分かった。これらのことから、M期におけるTPモチーフのリン酸化によってWee1の構造に変化が生じ、その結果Wee1のCdc2 Y15に対するリン酸化能が低下かすると考えられた。プロリルイソメラーゼであるPin1でpulldownアッセイを行ったところ、Wee1(WT)はM期特異的にPin1に結合できたのに対して、AP変異体では結合が見られなかった。これらのことより、TPモチーフの異性化によってM期におけるWee1生理活性が低下することが示唆されたので、Pin1のドミナントネガティブ変異体を用いて内在性Pin1の機能を阻害したところ、AP変異体と同程度にWee1(WT)の生理活性が強くなることが分かった。以上の結果より、M期におけるWee1のTPモチーフのリン酸化に伴う異性化(構造変換)がWee1の活性制御に重要な役割を担うことが強く示唆された。

The G2 phase and the M phase are progressing and the Cdc2/サイクリンB complex is controlled by the M phase promoting factor (MPF). Negative control factor であるWee1キナーゼはCdc2のY15をリン acidification することでMPF activity is inhibited している.ツメガエルWee1のN-terminal side regulation domain にはphysiological activity をpositive およびnegative にcontrol するregulatory モチーフ(それぞれNIN モチーフNamed by およびTPモチーフと)がNearly してexistent しており, TPモチーフはMPF によってM period specific にリン acidified される. This study is based on the details of the inactivation mechanism of the TP TP robot. TPモチーフのアラニンsubstitute (AP)は, wild-type (WT)よりもstrongくM-based blockingしたが, WTとAP variantのG2phaseにおけるCdc2 Y5 acidification can be used as an acidic acid.さらにIn vitro kinase assayのRESULTSから、MPFによるTPモチーフのリンAcidificationのみではWee1 activityが下注しないことが分かった.これらのことから、M-phase におけるTPモチーフのリン acidification によってWee1のstructure に変化が生じ、そのresult Wee1のCdc2 Y15 acidification energy is low and the acidification ability is low.プロリルイソメラーゼであるPin1でpulldownアッセイを行ったところ、Wee1( WT) and M phase-specific Pin1 binding and binding, AP allogeneic binding and binding. Wee 1. Low physiological activity. Pin1. The ティブ変 allogeneic を uses いて intrinsic Pin1 の function and blocks し た と こ ろ, and the AP 変 allogeneic と has the same degree of physiological activity as Wee1 (WT) and has a strong くなることが分かった. The result of the above is the acidification of the M-phase におけるWee1 TPモチーフのリン acidification and the anisotropy (Structural change) The active control of Wee1 is important.