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蛋白質の凝集現象と折れたたみ反応機構との関係

蛋白质聚集现象与折叠反应机制的关系

基本信息

批准号：
00J01316
负责人：
濱田大三
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Research Institute, Osaka Medical Center for Maternal and Child Health (2002)Osaka University (2000-2001)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

いくつかのアミロイド形成蛋白質について、赤血球などを溶血することがこれまでに報告されている。そこで、上記の方法で調整したアミロイド線維とアミロイド形成前の天然のウシ・βラクトグロブリンが、溶血活性を示すかについて調べた。その結果、いずれの構造状態も赤血球を溶血する活性を持たないことがわかった。現在、線維形成過程で作られる、前駆体状態で溶血活性が示されるかについて、解析中である。このような実験と平行して、ウシ・βラクトグロブリンのアミロイド線維形成に関わるアミノ酸配列について以下のようにして、調べた。まず、アミロイド線維をトリプシンにより、限定分解し、それでも不溶性分画に存在するペプチド領域を遠心により回収した。この不溶性分画(後にアミロイド線維を形成していることを電子顕微鏡観察により確認した)を、ジメチルスルフォキシドにより可溶化し、アセトニトリルに溶媒置換した後、質量分析計により、そのペプチド断片の質量を解析した。その結果、主に、天然構造上では、N末端側のAストランドを形成している領域周辺と思われる、断片が線維中に残っていることが示唆された。このアミノ酸領域が単独でもアミロイド形成能を保持しているか否かについて、調べるため、その領域に相当するペプチドを名古屋工業大学の田中俊樹教授に合成していただいた。このペプチドを上記の条件で、数カ月、保持してやることで、アミロイド線維を形成することが、チオフラビンTアッセイ、電子顕微鏡観察により、明らかになった。さらに、このようにして調整したペプチドのアミロイド線維を核として添加することで、βラクトグロブリン本体のアミロイド形成反応が促進されることが、わかった。この結果は、Aストランド領域が、βラクトグロブリンのアミロイド線維形成に重要な役割を果たしていることを示唆している。現在、これらの結果について、論文を執筆中である。

In addition, it is necessary to prepare a report on the formation of protein and red blood cells. The method described above adjusts the natural state of the enzyme before it is formed, and adjusts the hemolytic activity. The structure of the cell was determined by the enzyme activity. Now, the process of thread formation is in progress, the precursor state is in hemolytic activity, and the analysis is in progress. This is the first time that a person has been involved in the formation of a line of communication between the two groups. In addition to the above, the present invention also provides a method for determining the solubility of the solvent in the solvent, and a method for determining the solubility of the solvent. The insoluble fraction was determined by electron microscopy after solvent displacement and mass analysis. As A result, the main structure, the natural structure, the N terminal side of the A star, the formation of the field, the fragmentation of the line, the residual, the formation of the field. This domain is unique in its ability to form and maintain a variety of acids. This domain is equivalent to a synthesis by Professor Toshiki Tanaka of Nagoya University of Technology. The conditions listed above are: number of months, maintenance, line dimension formation, electron microscope observation, and illumination. In addition to the above, the adjustment of the line dimension of the target is carried out to form a reaction to the promotion of the target. The result is that the A/C field, the B/C field and the D/C field are important for the formation of the D/C field. Now, the results of the paper are in the process of writing.