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糖転移酵素GNT-Vのターゲット糖蛋白質の同定と癌転移機構の解明

糖基转移酶GNT-V靶标糖蛋白的鉴定及癌症转移机制的阐明

基本信息

批准号：
00J01991
负责人：
伊原伸治
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J01991/
关键词：
プロテアーゼ GnT-V 癌転移

项目摘要

N-アセチルグルコサミン転移酵素-V (GnT-V)は癌転移と直接関係している糖転移酵素である。しかし、その産物であるβ1-6鎖が基質糖タンパク質に対してどのような働きをもつのか明らかではなかった。申請者は、GnT-Vを過剰発現させた胃癌細胞が糖タンパク質である特定のセリンプロテアーゼの分泌量を増強することを発見し、癌転移との関連を明らかにした。まず遺伝子導入により、恒久的にGnT-Vを高発現するヒト胃癌細胞MKN45を作製した。ヌードマウスを用いて、GnT-V活性が有意に癌転移を促進することを確認した。その一因としてGnT-Vを高発現するMKN45細胞では、培養上清に顕著なセリンプロテアーゼの放出を確認した。ウエスタンブロット及び免疫沈降により、このプロテアーゼはII型の膜貫通型セリンプロテアーゼのマトリプターゼと同定した。さらにレクチンブロット解析により糖鎖構造を検討すると、GnT-Vの産物であるβ1-6鎖の付加がみられた。パルスチェイス及びウエスタンブロット法によりβ1-6鎖修飾を受けたマトリプターゼは分解耐性になることを明らかにした。さらに糖鎖構造をレクチンブロットで検討すると、GnT-V過剰発現癌細胞より精製したマトリプターゼにはβ1-6鎖の付加がみられた。また自己分解を検討すると、β1-6鎖をもたないマトリプターゼは24時間後には大部分が分解されたが、β1-6鎖をもつマトリプターゼはほとんど分解されなかった。またトリプシンに対しては分解の抑制がみられたが、他のプロテアーゼに関して差は認められなかった。合成蛍光基質を用いた結果、そのプロテアーゼ活性に大きな差はみられなかった。以上の結果より、β1-6鎖はマトリプターゼの活性には影響を与えず、その安定性を増大されることが明らかになった。

N-transferase-V (GnT-V), tumor transfer, direct transfer, glucose transfer, enzyme transfer, and so on. I don't know what to say. I don't know. I don't know what to say. Applicants and GnT-V filters show that gastric cancer cells are sensitive to glucose, and so on. In the long-term GnT-V, you can see that the cancer cells of stomach cancer are MKN45 in order to treat them. The activity of GnT-V is intended to promote the migration of cancer. Because of the high level of GnT-V, you can see that the MKN45 cell is broken, and the supernatant is saying that you can confirm that it is released. This is the same as that of the immune system, the immune system and the immune system. Please tell me that the sugar is used to make products such as β 1-6, GnT-V, and so on. Please tell me that the method is not correct and that the β 1-6 method is sensitive to decomposition tolerance. The cells of cancer patients who were diagnosed with cancer, such as those who were diagnosed with cancer, and those who were diagnosed with GnT-V, were treated with the addition of β 1-6. After 24 hours of decomposition, most of them were decomposed by themselves, β 1-6 and β 1-6. After 24 hours, most of them were decomposed. I don't know what to do. I don't know. I don't know. The synthesis of photosensitizers was based on the results of photoluminescence, and the results showed that there was a significant difference in the activity of photosensitizers. The above results show that the activity of β 1-6 is better than that of β 1-6. The results of the above results show that the activity of β 1-6 is better than that of β 1-6 and β 1-6.