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小脳におけるニューロン/グリア相互依存的発達とその分子機構に関する研究

小脑神经元/胶质细胞相互依赖的发育及其分子机制研究

基本信息

批准号：
00J07190
负责人：
深谷昌弘
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

小脳において既知の分子とは異なるが相同な細胞接着分子を追求する目的で、種々の接着分子の機能領域に対する抗体を作製した。それらの抗体を用いて免疫組織化学的にマウスの脳を染色したところ、その中の一つの抗体が本来その接着分子を有する神経細胞に加え小脳プルキンエ細胞膜を認識し、抗体が認識する分子の分子量が若干異なっていることが判明した。その抗体を用いて抗体スクリーニングを行い、プルキンエ細胞とバーグマングリアとの新規接着分子と考えられる分子のcDNAの単離を試みた。さらに、この抗体の認識アミノ酸配列から既知のタンパク質との相同性検索を行い、相同性の高い分子の脳内分布の解析を試みた。マウス小脳cDNAライブラリーを用いた抗体スクリーニングの結果、いくつかの抗体陽性クローンが得られた。それらのクローンからcDNAを単離しシークエンスを行い塩基配列を決定した。それらの塩基配列と既知のマウス遺伝子との相同性を検索したところ新規分子であることが判明した。その塩基配列をもとに45塩基のDNAオリゴプローブを作成しin situハイブリダイゼーションをマウスの脳で行った。その結果、すべてのプローブで神経細胞に広く分布する発現パターンとなり、小脳プルキンエ細胞に特異的に発現するクローンは得られなかった。また。アミノ酸配列検索の結果から得られた分子においても小脳プルキンエ細胞に特異的に発現する分子は単離できなかった。今後も、マウス小脳cDNAライブラリーを用いた抗体スクリーニングを行いながら、抗体を用いた脳内タンパクの精製を試み、さらにマウスゲノムでの検索も試み、小脳プルキンエ細胞特異的接着分子を多方面から検索、解析していく予定である。

Small molecules are known to be different from each other, and antibodies are used to target the same cell adhesion molecules, species, and functional domains of the molecules. Immunohistochemical staining of the antibody revealed that the molecular weight of the antibody was different from that of the cell membrane. The antibody is used in the study of molecular DNA. In this paper, we try to analyze the distribution of homo sapiens in the antibody by the method of acid alignment, identity analysis of homo sapiens and molecular identity analysis The results of the antibody test were obtained when the cDNA was used. The sequence of genes is determined by the sequence of genes. The basic structure of the system is known to be identical to that of the system. The DNA sequence of the 45-mer gene is determined by the DNA sequence of the 45-mer gene As a result, the distribution of brain cells was found to be different from that of small cells.また。The results of the acid alignment assay show that there are molecular differences in the expression of small and cell-specific proteins. In the future, the antibody will be used in the purification of the antibody, and the cell specific binding molecule will be analyzed and determined in many ways.