ショウジョウバエヘパラン硫酸3-O硫酸基転移酵素の機能に関する研究

果蝇硫酸乙酰肝素3-O磺基转移酶的功能研究

• 批准号: 00J07447
• 负责人: 神村 圭亮
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J07447/
• 关键词: ショウジョウバエ; ヘパラン硫酸; 3-O硫酸基転移酵素; トランスジェニックRNAi; Notch

ヘパラン硫酸(HS)は、細胞増殖因子、細胞接着因子など、多様な分子と相互作用し、様々な生物学的活性を示す。HSのこの多彩な機能は、「異なる硫酸化パターンを持つHSが、それぞれ異なるタンパク質と結合する」ことにより特異的に調節されると考えられている。しかし、このような特異的硫酸化が、生体内において細胞外からのシグナルの特異性を決定しているのかどうか未だに不明である。HSの異なる部位の硫酸化は、それぞれ異なるHS硫酸転移酵素により触媒される反応である。そこで私は、in vivoにおけるHSの特異的硫酸化の意義を明らかにするために、遺伝学的手法が有効なショウジョウバエを用い、3-O硫酸転移酵素の機能解析をおこなった。ショウジョウバエ3-O硫酸転移酵素(dHS3ST)の機能を調べるために、トランスジェニックRNAi法を用いて解析をおこなった。dHS3STトランスジェニックRNAi個体(以下、dHS3ST RNAi個体と呼ぶ)は、様々な末梢感覚器の数の増加、翅脈の過形成、翅縁の欠失、などの表現型を示した。これらの表現型は全てNotch変異体が示すものと酷似するため、dHS3ST遺伝子とNotchシグナルとの関係に焦点を当て引き続き実験を行った。dHS3ST RNAi個体の表現型は、様々なNotchシグナル系遺伝子の変異を合わせ持つことにより悪化した。またdHS3ST RNAiは、翅原基におけるNotch標的遺伝子群の発現を抑制した。これらの結果は、dHS3STがNotchシグナル伝達に機能することを示している。さらに、遺伝学的上位性の解析から、dHS3STはNotchリガンドをコードするDeltaより下流、細胞内Notchシグナル系因子より上流で機能をしていることが明らかになった。またdHS3ST RNAiは細胞膜表面に存在するNotchタンパク質レベルを著しく減少させる。以上の結果から、3-O硫酸化HSが、(1)Notch遺伝子の発現、(2)Notchタンパク質の細胞膜表面への提示、もしくは(3)Notchタンパク質の安定化、のいずれかに必要であることが示唆された。

Sulfuric acid (HS), cytosolic factors, cellular factors, poly-molecular interactions, biological activity indicators. The HS multi-color machine, the sulfation equipment, the machine, the computer, the computer. The sulfation of the drug, the sulfation of the drug, the concentration of the extracellular substance in the body, the specificity of the drug, the sulfation of the drug, the extracellular drug of the mouse, the sulfation of the drug, the extracellular drug of the mouse, the sulfation of the drug, and the sulfation of the drug. The sulfated parts of HS were sulfated, HS sulfuric acid transferase, catalyst, anti-sulfuric acid. The meaning of sulfation of in vivo, in vivo, HS, sulfation, and so on, the techniques used in this study include the use of sulfuric acid, and the ability to analyze the enzyme transfer machine of sulfuric acid. The mechanism of 3-O sulfuric acid transferase (dHS3ST) was used to determine the concentration of 3-O sulfuric acid transferase (dHS3ST). The RNAi method was used to analyze the enzyme activity. The number of the RNAi (below, dHS3ST RNAi), the number of the terminal sensor, the formation of the wing, the loss of the wing, and the shape of the table show that the dHS3ST is missing. The full Notch body of the table shows that it is very similar to that of the dHS3ST table, which is similar to that of the dHS3ST table. The dHS3ST RNAi individual table type, the Notch system, the child system, the system and the system. The subgroup of dHS3ST RNAi, wing primordia, Notch, suppresses it. The results of the test results and the dHS3ST Notch test results show that the machine is able to verify the performance of the computer. The epistasis of epistasis and epistasis, dHS3STATE Notch epistasis, Delta downstream, intracellular Notch contagion, high-level factor, high-level mechanism, high-level, high-level, high-level There is a small amount of dHS3ST RNAi on the surface of the cell membrane. There is a small amount of DNA on the membrane surface. The above results showed that HS was sulfated, (1) Notch was detected, (2) the surface of cell membrane was detected, (3) Notch was stabilized, and it was necessary to show that it was instigated.