コンディショナルノックアウト技術を駆使した熱ショック蛋白質の新機能解析

使用条件敲除技术进行热休克蛋白的新功能分析

• 批准号: 00J11031
• 负责人: 上口 権二郎
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J11031/
• 关键词: 分子シャペロン; 熱ショック蛋白質; ポリグルタミン病; DNAJC8

70kDa熱ショック蛋白質(HSC70)は細胞質に豊富に存在し、種を越えて保存されている分子シャペロンで、細胞内蛋白質の品質管理に重要な役割を果たしている。本研究では、細胞機能におけるHSC70の役割を解析する目的で、HSC70コンディショナルノックアウト細胞の作成を試みた。しかし、HSC70-like pseudogeneが多数存在したためターゲッティングが困難であった。そこでHSC70と結合し、その共役分子シャペロンであるHSP40ファミリー分子について遺伝子解析と機能解析を行い、そのターゲティングを試みている。データーベース検索により、新規HSP40ファミリー分子を3種類クローニングした。このうち2つの分子、DNAJ-B12とDNAJ-C8は細胞内でHSC70と結合し、いずれも細胞質及び核に局在することが判明した。組織発現では、前者は大脳、前立腺組織に多く発現し、後者は骨格筋、心筋、中枢神経に発現していた。DNAJ-C8に関しては、神経変性疾患であるポリグルタミン病の原因遺伝子の一つatrophin-1とのアミノ酸相同配列があり、現在抗体を作成してポリグルタミン病の病態形成への関与について解析中である。さらに、小胞体に局在する新規HSP40ファミリーを2種類クローニングした。そのうち、ERdj3に関しては上皮細胞や形質細胞に豊富に存在し、分泌蛋白の品質管理に関与していることが示唆された。現在siRNAを用いた遺伝子発現ターゲティングノックアウトを試みている。一方、リンパ球の細胞表面抗原に対する抗体で、細胞死を誘導することのできる単クローン抗体Hal-1を樹立し、その抗原遺伝子の同定を試みた。レトロウイルスを用いた発現クローニングの結果、細胞表面にHal-1抗原を高発現する細胞株を樹立することに成功し、現在Hal-1遺伝子について解析中である。

The 70kDa protein (HSC70) plays an important role in the production and preservation of intracellular proteins. The aim of this study is to analyze the function of HSC70 and to test the cell production of HSC70. HSC70-like pseudogene exists in most cases. HSC70 is a binding molecule, and HSP40 is a binding molecule. The new HSP40 is a new type of molecule. DNAJ-B12 and DNAJ-C8 were identified in the cytoplasm and nucleus of HSC70. Tissue development: the former is mainly developed in large and anterior gland tissues, while the latter is mainly developed in bone, muscle and central nervous system. DNAJ-C8 is related to the pathogenesis of neurodegenerative diseases and the analysis of neurodegenerative diseases. The new regulation HSP40 provides for two types of cellular services. ERdj3 is related to the abundance of epithelial cells and cytoplasmic cells, and the quality management of secreted proteins. Now siRNAs are used in the development of DNA. The antibody to the cell surface antigen of a protein was tested for the identification of the antigen. The results of cell culture and the establishment of cell lines with high levels of Hal-1 antigen on cell surfaces were successful. Now Hal-1 antigen analysis is ongoing.

项目成果

Nomura H, et al.: "A new liver metastatic and peritoneal dissemination model established from the same human pancreatic cancer cell line : analysis using cDNA macroarray"Clin. Exp. Metastasis. 19. 391-399 (2002)

Nomura H 等人：“从相同的人胰腺癌细胞系建立的新的肝转移和腹膜传播模型：使用 cDNA 宏阵列进行分析”Clin。

Nishimori H, et al.: "A new peritoneal dissemination model established from the human pancreatic cancer cell line"Pancreas. 22・4. 345-356 (2001)

Nishimori H等人：“从人胰腺癌细胞系建立的新的腹膜传播模型”Pancreas 22・4（2001）。

Shegehara, K., et al.: "Increased serum IL-12p40 levels in pulmonary sarcoidosis"Clinical and experimental Immunology. (in press).

Shegehara, K. 等人：“肺结节病中血清 IL-12p40 水平升高”临床和实验免疫学。

Nakajima F, et al.: "Gene Expression Screening using cDNA Macroarray for Clarification of the Mechanisms of Peritoneal Dissemination of Pancreatic Cancer"Surgery Today. (in press).

Nakajima F 等人：“使用 cDNA 宏阵列进行基因表达筛选，以阐明胰腺癌腹膜播散的机制”《今日外科》。

Kishi A, et al.: "The cell surface-expressed HSC70-like molecule preferentially reacts with the rat T-cell receptor Vdelta6 family"Immunogenetics. 53・5. 401-409 (2001)

Kishi A 等人：“细胞表面表达的 HSC70 样分子优先与大鼠 T 细胞受体 Vdelta6 家族反应”免疫遗传学 53·5 (2001)。